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内源性BMSCs在骨修复中的作用及微环境相关趋化因子的表达

作　者: 张宪郁
导　师: 徐皓
学　校: 福建医科大学
专　业: 外科学
关键词: 绿色荧光蛋白间充质干细胞骨折愈合趋化因子
分类号: R683
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 82次
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内容摘要

目的:(1)分离、培养及鉴定携带绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)基因的骨髓源性间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs);(2)对内源性BMSCs进行示踪及在骨修复中的作用进行评估;(3)检测骨折后1d,3d,5d,7d,14d,21d骨折微环境中基质细胞衍生因子1 ( stromal cell-derived factor-1 ,SDF-1)、干细胞因子(stem cell factor,SCF)、肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)、粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)、单核细胞趋化蛋白l(monocyte chemoattractant protein l,MCP-1)、间质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的蛋白表达水平,筛选出表达量高且与BMSCs趋化规律相关的因子。方法:(1)经密度离心法从GFP转基因C57BL/6小鼠骨髓内分离培养BMSCs。并通过向成骨样细胞、脂肪样细胞分化证明其具有多向分化能力,利用流式细胞仪检测其细胞表面标志物CD44和CD34的表达。(2)4周龄普通雌性C57BL/6小鼠用10Gy的X线照射后,将携带GFP的BMSCs与普通C57BL/6小鼠的骨髓非贴壁细胞制成混合细胞悬液后从其尾静脉内注入,建立嵌合体动物模型。(3)利用嵌合体动物模型制造胫骨骨折模型,在不同时相点检测骨折部位组织GFP阳性细胞占所有细胞的比例、来源于BMSCs的成骨细胞占全部成骨细胞的比例,判断来源于骨髓的BMSCs在骨折修复中的作用;利用免疫组化等方法检测骨折部位不同时相点SDF-1、CSF、HGF、G-CSF、MCP-1等趋化因子的蛋白表达水平。结果:(1)分离培养的BMSCs呈克隆样生长且呈GFP阳性;经成骨诱导培养后出现钙沉积;经成脂肪诱导后形成脂肪滴;(2)骨折局部GFP阳性细胞占所有细胞比例在术后1d、5d、14d分别为3.011±0.911%、9.031±0.145%、12.064±0.145%;来源于BMSCs的成骨细胞占全部成骨细胞的50%以上;(3)骨折后各时相点微环境中SDF-1、CSF、HGF、MCP-1、MMP-9有不同程度的表达,G-CSF无明显表达。SDF-1的表达量相对最高。经相关分析认为:SDF-1在骨折微环境中的表达与BMSCs趋化规律具有相关关系。结论:(1)通过密度离心法可以从GFP转基因C57BL/6小鼠骨髓内获取GFP阳性的BMSCs;(2)骨髓内的BMSCs参与骨折修复并在其中起到了重要作用;(3)SDF-1对于促进BMSCs的定向趋化并参与骨组织修复中可能起到了重要作用。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-6
前言  6-7
第一部分携带 GFP 基因的 BMSCs 的分离、培养及鉴定  7-16
  材料与方法  7-11
  结果  11-14
  讨论  14-15
  小结  15-16
第二部分自体 BMSCs 在骨折修复中的作用  16-26
  材料与方法  16-19
  结果  19-24
  讨论  24-25
  小结  25-26
第三部分骨折微环境相关趋化因子的表达  26-38
  材料与方法  26-28
  结果  28-33
  讨论  33-37
  小结  37-38
全文结论  38-39
参考文献  39-44
缩略词表  44-45
致谢  45-46
综述  46-51

内源性BMSCs在骨修复中的作用及微环境相关趋化因子的表达

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