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铁皮石斛（Dendrobium candidum）组培快繁及其抗癌作用的研究

作　者: 郭洪波
导　师: 陈丽静
学　校: 沈阳农业大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 铁皮石斛激素浓度有机添加物菌根菌抗肿瘤 bcl-2基因 p53基因
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 527次
引　用: 3次
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内容摘要

铁皮石斛是我国传统名贵中药之一,被收载入《中国药典》2005年版,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功能,具有很高的药用价值和经济价值。铁皮石斛的种子非常细小,自然条件下很难萌发生长。由于近年来的过度采挖、自然生境的破坏,其野生资源日益匮竭。本文拟通过现代生物技术的手段实现铁皮石斛的工厂化快繁,从而取代和保护铁皮石斛的野生资源。本研究以茎节为材料建立无菌系,筛选适于铁皮石斛增殖和生根的培养条件。结果表明,利用次氯酸钠消毒8min,后,外植体的成活率可达到85%,无菌率达到90%。MS培养基最适于铁皮石斛的生长,60天达到较大的增殖倍数。以NAA0.4 mg·L^-1、6-BA5mg·L^-1为继代培养基时铁皮石斛植株健壮,增殖倍数高达到3.2倍。NAA0.3 mg·L^-1、6-BA2 mg·L^-1时,最适于铁皮石斛生根,生根率达到96.67%。本试验研究了天然添加物对铁皮石斛生长的影响。结果表明,香蕉汁能促进植株生长,根粗壮,整齐,叶色浓绿,茎粗节短;能显著促进铁皮石斛的芽增殖,可达到4.98倍。还能够促进生物碱和多糖的积累,分别达到2.8mg·g^-1和19.2%。当添加20%的土豆汁时,铁皮石斛的增重倍数达到3.51倍。这种作用可能与天然添加物中的植物激素和可溶性糖有关,土豆中含有较丰富的生长素和细胞分裂素,分别达到1.07μg·g^-1和0.89μg·g^-1,而香蕉中脱落酸的含量最高为4.61μg·g^-1,土豆和香蕉中均含有丰富的可溶性糖。本试验研究了菌根菌对铁皮石斛生长的影响。从春石斛和蝴蝶兰中分离出11株菌根菌,经液体发酵后,分别提取菌丝提取物,发酵液和发酵液菌丝混合物,结果表明菌株ph5最有利于铁皮石斛增重和干物质的积累,发酵液菌丝混合提取液对铁皮石斛的促进作用最强。同时能够促进铁皮石斛体内生长素、细胞分裂素的合成,脱落酸含量也显著高于正常对照组。本研究证明了铁皮石斛试管苗同野生铁皮石斛一样具有显著的抗肿瘤活性。小鼠实验表明,铁皮石斛能够显著延长S180铁皮石斛试管苗腹水小鼠的生存期,抑制肿瘤生长,增加免疫器官比重,提高外周血白细胞数目。体外抗肿瘤实验表明,铁皮石斛含药血清能够明显抑制SGC7901细胞增殖,促进SGC7901细胞凋亡。铁皮石斛的抗肿瘤作用可能与抑制bcl-2基因表达和促进p53基因表达有关。

全文目录

摘要  10-11
ABSTRACT  11-12
前言  12-20
  1 石斛的有效成分  12-14
    1.1 生物碱  12-13
    1.2 菲类和联苄类  13
    1.3 多糖  13-14
    1.4 其它类成分  14
  2 主要药理作用  14-15
    2.1 增强机体免疫力  14-15
    2.2 抗肿瘤作用  15
    2.3 抗衰老作用  15
    2.4 抗血小板凝集作用  15
  3 石斛菌根菌的研究  15-20
    3.1 菌根的概念  16
    3.2 兰科菌根的特点  16
    3.3 兰科植物与内生真菌之间的专一性  16-17
    3.4 兰科植物菌根菌研究中存在的问题及研究方向  17-18
    3.5 展望  18-20
第一章铁皮石斛无菌体系的建立  20-27
  1.1 试验材料与方法  20-21
    1.1.1 实验材料  20
    1.1.2 实验方法  20-21
  1.2 结果与分析  21-25
    1.2.1 不同消毒时间对铁皮石斛再生能力的影响  21
    1.2.2 不同基础培养基对铁皮石斛生长的影响  21
    1.2.3 铁皮石斛生长的最佳时间  21-22
    1.2.4 不同生长素浓度对茎段腋芽的诱导作用  22-23
    1.2.5 不同提取物对芽增殖的影响  23-24
    1.2.6 不同激素配比对铁皮石斛生根的影响  24
    1.2.7 不同提取物对铁皮石斛生根的影响  24
    1.2.8 组培苗的移栽  24-25
  1.3 讨论  25-27
第二章有机添加物对铁皮石斛生长的影响  27-36
  2.1 材料与方法  27-30
    2.1.1 材料  27
    2.1.2 实验方法  27-30
  2.2 结果与分析  30-34
    2.2.1 天然添加物对铁皮石斛组培苗生长的影响  30-31
    2.2.2 天然添加物对铁皮石斛增重倍数的影响  31-32
    2.2.3 天然添加物对铁皮石斛生物碱含量的影响  32
    2.2.4 天然添加物对铁皮石斛多糖含量的影响  32
    2.2.5 天然添加物中生长素的含量  32-33
    2.2.6 天然添加物中细胞分裂素的含量  33-34
    2.2.7 天然添加物中脱落酸的含量  34
    2.2.8 天然添加物中可溶性糖的含量  34
  2.3 结论与讨论  34-36
第三章菌根菌提取物对铁皮石斛生长的影响  36-43
  3.1 材料与方法  36-37
    3.1.1 材料  36
    3.1.2 实验方法  36-37
  3.2 结果与分析  37-41
    3.2.1 不同菌株提取物对铁皮石斛增重倍数和鲜干比的影响  37-38
    3.2.2 不同菌株提取物对铁皮石斛生长素含量的影响  38
    3.2.3 不同菌根菌对铁皮石斛分裂素含量的影响  38-39
    3.2.4 不同菌根菌对铁皮石斛脱落酸含量的影响  39
    3.2.5 ph4菌株不同处理方式对铁皮石斛增重倍数和鲜干比的影响  39-40
    3.2.6 ph4菌株不同处理方式对铁皮石斛生长素含量的影响  40
    3.2.7 ph4菌株不同处理方式对铁皮石斛分裂素含量的影响  40
    3.2.8 ph4菌株不同处理方式对铁皮石斛脱落酸含量的影响  40-41
  3.3 结论与讨论  41-43
    3.3.1 结论  41-42
    3.3.2 讨论  42-43
第四章铁皮石斛抗肿瘤作用的研究  43-55
  4.1 材料与方法  43-46
    4.1.1 材料  43
    4.1.2 实验方法  43-46
  4.2 结果与分析  46-52
    4.2.1 石斛提取物对S180腹水小鼠生存期的影响  46
    4.2.2 石斛提取物对S180的抑制作用  46-47
    4.2.3 石斛提取物对小鼠免疫器官的影响  47
    4.2.4 石斛提取物对小鼠外周白细胞的影响  47-48
    4.2.5 石斛提取物与化疗药物联用对小鼠生存期的影响  48-49
    4.2.6 石斛提取物与化疗药物联用对S180的抑制作用  49
    4.2.7 石斛提取物与化疗联用对小鼠免疫器官的影响  49-50
    4.2.8 石斛提取物与化疗联用对小鼠外周白细胞的影响  50
    4.2.9 天然石斛与组培石斛对S180的抑制作用  50
    4.2.10 含药血清对SGC7901细胞增殖的影响  50-51
    4.2.11 含药血清对SGC7901细胞凋亡的影响  51-52
    4.2.12 含药血清对SGC7901细胞bcl-和p53表达的影响  52
  4.3 讨论与结论  52-55
    4.3.1 讨论  52-54
    4.3.2 结论  54-55
结论  55-56
参考文献  56-59
致谢  59-60
攻读硕士期间发表的论文  60

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