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复方斑蝥的抗肝癌作用研究

作　者: 姜新根
导　师: 刘顺会
学　校: 广东药学院
专　业: 中药学
关键词: 复方斑蝥 P53基因 c-Myc基因血清药理学 H22肝腹水模型
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的探讨复方斑蝥对肝癌的作用效果和作用机制。方法用血清药理学方法制备复方斑蝥血清并处理人肝癌Bel-7402细胞, MTT方法观察其对人肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制作用, RT-PCR技术检测其对c-Myc,P53基因表达的影响,流式细胞仪检测含药血清对细胞周期的作用;使用鼠肝癌细胞H22,建立肝腹水模型,观察复方斑蝥对荷腹水瘤小鼠生存质量及生存期的影响。结果复方斑蝥含药血清能够显著抑制人肝癌Bel-7402细胞的增殖。通过MTT实验观察不同含药浓度血清组对人肝癌Bel-7402细胞作用24h、48h、72h,复方斑蝥含药血清对人肝癌Bel-7402细胞的抑制作用呈现时间-浓度的依赖性。低浓度、中浓度、高浓度含药血清作用24h后对人肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制率分别为:6%、12%、13%;作用48h后对人肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制率分别为:13%、15%、27%;作用72h后对人肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制率分别为:15%、32%、32%;与对照组血清相比较,含药血清对人肝癌Bel-7402细胞增殖抑制作用存在显著性差异(p<0.05)。通过含药血清对人肝癌Bel-7402细胞作用48h,RT-PCR实验检测到含药血清能够下调c-Myc,上调P53基因的表达;流式细胞仪观察不同浓度药物的含药血清将细胞阻滞在G2M期。其中中、高浓度药物组血清作用三个时间对后,与对照组相比较存在显著差异性(p<0.05)。复方斑蝥治疗肝腹水模型小鼠,对其生存期延长效果不明显,但对其生存质量(如毛色、活动能力、对环境的敏感性等)有明显提升作用。结论复方斑蝥能够抑制人肝癌细胞的增殖,其作用机制可能是通过影响P53、c-Myc基因表达,进而将细胞阻滞在G2M期来实现。体内实验显示复方斑蝥可能提高荷瘤小鼠的免疫力,从而改善荷瘤小鼠生存质量。血清药理学与分子生物学相结合能够有效地展示与药物作用相关的分子,可以作为研究复方药理的一个初步技术平台。

全文目录

中文摘要  6-7
Abstract  7-9
第一章序言  9-19
  1. 肝癌的流行病学现状及可能的致病途径  9-10
    1.1 肝癌的流行病学现状  9
    1.2 肝癌可能的致病途径  9-10
  2. 肝癌治疗的研究进展  10-11
  3. 中医药对肝癌的治疗现状  11-13
    3.1 肝癌的中医理论  11
    3.2 中医对肝癌的治疗现状  11-12
    3.3 中医药治疗肝癌的优势  12-13
  4. 复方斑蝥对肝癌的治疗作用  13-14
    4.1 复方斑蝥的临床应用  13
    4.2 复方斑蝥中各成分的作用及其作用机制  13-14
  5. P53、c-Myc 基因与肝癌的关系  14-16
    5.1 P53 基因与肝癌的关系  14-15
    5.2 c-Myc 基因与肝癌的关系  15-16
  6. 血清药理学的研究进展  16-19
    6.1 中药应用于离体实验的缺陷  16
    6.2 血清药理学的产生及优势  16-19
第二章复方斑蝥含药血清抑制人肝癌BEL-7402 细胞增殖的机制研究  19-32
  1 材料与方法  19-25
    1.1 实验材料  19-22
      1.1.1 细胞株  19
      1.1.2 实验动物  19
      1.1.3 实验药物  19-20
      1.1.4 实验仪器  20
      1.1.5 实验试剂  20-21
      1.1.6 试剂配制  21-22
    1.2 实验方法  22-25
      1.2.1 复方斑蝥煎剂的制备  22
      1.2.2 给药方式  22
      1.2.3 血清制备  22
      1.2.4 Bel-7402 细胞的培养  22
      1.2.5 总RNA 的提取  22
      1.2.6 MTT 法检测含药血清对人肝癌Bel-7402 细胞的作用  22-23
      1.2.7 RT-PCR 检测 P53，c-Myc 基因的表达  23-24
      1.2.8 流式检测细胞周期  24
      1.2.9 数据处理  24-25
  2. 实验结果  25-30
    2.1 人肝癌Bel-7402 细胞增殖抑制作用  25
    2.2 含药血清对人肝癌Bel-7402 细胞相关基因表达的影响  25-26
    2.3 流式细胞仪检测细胞周期  26-30
  3 讨论  30-32
第三章复方斑蝥对H22 肝癌腹水模型小鼠的影响  32-40
  1. 材料与方法  32-33
    1.1 实验材料  32
      1.1.1 实验药物  32
      1.1.2 实验细胞  32
      1.1.3 实验动物  32
      1.1.4 实验器材  32
    1.2 实验方法  32-33
      1.2.1 复方斑蝥煎剂的制备  32
      1.2.2 H22 细胞的复苏  32-33
      1.2.2 腹水的抽取  33
      1.2.3 腹水的接种  33
      1.2.4 分组及给药  33
      1.2.5 观察内容  33
      1.2.6 数据处理  33
  2 实验结果  33-37
    2.1 腹水小鼠的行为能力、形态比较  33-36
    2.2 腹水小鼠的体重增长率比较  36-37
    2.3 小鼠的生存期对比  37
  3 讨论  37-40
参考文献  40-47
附录1 英文缩略词表  47-48
附录2 肝移植筛选的标准及效果比较  48-49
附录3 自制小鼠行为视频监控装置  49-52
附录4 肝癌TNM 临床分类分类  52-53
附录5 攻读学位期间发表的论文  53-54
致谢  54

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