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钠氢交换蛋白在DNA损伤诱导细胞凋亡中的作用及其机制的初步研究

作　者: 阎妍
导　师: 庞天翔；熊冬生；李庆华
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 病理与病理生理学
关键词: Etoposide BCR/ABL NHE1 pH_i 细胞凋亡
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：本研究通过比较Etoposide及放射线照射对K562、HL-60、Jurkat细胞的钠氢交换蛋白(Na+/H+exchanger 1,NHE1)表达水平及细胞内pH值(intracellular pH, pHi)的影响,探讨在依托泊苷诱导细胞凋亡过程中NHE1表达变化及其调控凋亡过程的机制。方法：应用Etoposide处理或照射5Gy放射剂量K562、HL-60、Jurkat细胞,诱导细胞凋亡。分别采用实时定量RT-PCR技术及Western blot检测物理化学因素所至DNA损伤对NHE1的mRNA表达水平和蛋白表达水平的影响。应用激光共聚焦显微镜测定K562、HL-60、Jurkat细胞pHi的变化。应用DNA片段化检测和远末端缺口标记(TUNEL)法分析细胞凋亡。同时应用NHE1特异抑制剂卡立泊来德(Cariporide)作用于K562、HL-60细胞,比较二种细胞凋亡及pHi的变化。结果：Etoposide作用24小时后能有效地诱导BCR/ABL阴性的HL-60、Jurkat细胞凋亡,但对BCR/ABL阳性的K562细胞却没有明显的诱导凋亡的作用。放射线照射也只能有效的诱导HL-60、Jurkat细胞凋亡,而对K562细胞也没有明显地诱导凋亡的作用。Etoposide和放射线照射能使HL-60、Jurkat细胞中NHE1 mRNA水平和蛋白水平表达先后上调。处理6小时之后,随着NHE1蛋白表达水平增高,HL-60、Jurkat细胞pHi升高。经NHE1特异性抑制剂卡立泊来德预处理的细胞,再用依托泊苷处理24h之后,由于pHi没有明显升高,细胞凋亡率的升高幅度明显降低。结论：Etoposide及放射线照射都能使BCR/ABL阴性的细胞的NHE1 mRNA转录增加,NHE1的蛋白表达上调,诱导出非常明显的细胞凋亡,这种细胞凋亡结果依赖于NHE1表达量升高导致的细胞pHi升高。而这些物理和化学因素刺激却不能使BCR/ABL阳性细胞的NHE1表达增高,诱导的细胞凋亡作用也明显减弱。在理化因素诱导细胞凋亡过程之中,NHE1表达增高所至的细胞pHi升高发挥着重要的作用。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-6
前言  6-8
材料和方法  8-18
结果  18-28
讨论  28-33
结论  33-34
参考文献  34-36
综述  36-47
  1. 钠氢交换蛋白分子结构及其生物学功能  36-42
  2. 细胞pH_i改变与细胞凋亡的关系  42-47
附录一英文缩写词  47-48
附录二在学期间发表论文  48-49
致谢  49-51

钠氢交换蛋白在DNA损伤诱导细胞凋亡中的作用及其机制的初步研究

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