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益气补肾中药对大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用

作　者: 李伟
导　师: 刘德山
学　校: 山东大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 海马神经元缺氧复氧损伤益气补肾中药抗氧化凋亡 BDNF
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:1.观察益气补肾中药-脑神康对体外培养缺氧复氧损伤大鼠海马神经元的形态学、细胞存活率及乳酸脱氢酶（LDH）活力的影响。2.观察脑神康对体外培养缺氧复氧损伤大鼠海马神经元超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量的影响。3.观察脑神康对体外培养缺氧复氧损伤大鼠海马神经元凋亡率、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA表达的影响。方法:1.成年雄性Wistar大鼠随机分为2组,分别予脑神康及同等量生理盐水灌胃,取血制备大鼠正常血清和含药血清。选取出生24h内新生Wistar大鼠（雌雄不限）,75%乙醇消毒后,剥离头皮及颅骨,取出完整脑组织,钝性分离海马,原代培养大鼠海马神经元,通过差速贴壁法进行纯化并加入阿糖胞苷抑制非神经元细胞的生长,免疫组织化学法进行神经元微管相关蛋白（MAP-2）鉴定,证实培养的细胞为神经元并确定其纯度,取培养8天的神经元用于实验。2.根据药物不同浓度将神经元随机分为5组:①对照组:正常换液培养;②损伤组:于培养第8d建立缺氧复氧损伤模型:造模前换以无血清培养液,然后置于充以95%N₂和5%CO₂的乏氧培养箱内（箱内氧气含量低于1%）,37℃培养6h后取出,换以含10%正常大鼠血清的DMEM/F12培养液,置37℃5%CO₂培养箱中继续培养24h;③中药低、中、高浓度组:建立缺氧复氧损伤模型,在复氧前分别加入含低（5%）、中（10%）、高（20%）三个浓度含药血清的DMEM/F12培养液。3.每组细胞均在倒置相差显微镜下动态观察一般形态学变化,MTT检测各组神经元存活率,试剂盒测定MDA含量及SOD、LDH活性,流式细胞仪测凋亡率,PT-PCR法半定量检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及BDNF mRNA的表达。结果:1.不同浓度的含药血清作用24h后,可观察到损伤神经元形态改变减轻,MTT结果显示益气补肾中药可明显提高神经元存活率（均P＜0.01）,且中药各浓度组均较损伤组LDH活力下降（均P＜0.01）,表明中药脑神康发挥了对损伤神经元的保护作用。2.数据结果显示损伤组MDA含量比对照组明显升高而SOD活性则明显下降（均P＜0.01）,中药各浓度组所测得的MDA含量较损伤组降低（均P＜0.01）,SOD活性升高（均P＜0.01）,且具有明显的剂量依赖性。3.流式细胞术检测结果显示,损伤组细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）,中药各浓度组可显著降低神经元的凋亡率（均P＜0.01）。PT-PCR结果表明,与对照组相比,损伤组神经元促凋亡基因Bax的mRNA表达量明显增加（P＜0.01）,而抑制凋亡基因Bcl-2的mRNA表达量则明显下降（P＜0.01）,Bcl-2/Bax比值降低（P＜0.01）;与损伤组相比,中药各浓度组均可增加Bcl-2的mRNA表达量（均P＜0.01）,降低Bax的mRNA表达量（均P＜0.01）,使Bcl-2/Bax比值升高（均P＜0.01）,具有明显的量效关系。且与损伤组相比,中药各浓度组BDNF mRNA表达量均明显增加（均P＜0.01）。结论:益气补肾中药-脑神康对缺氧复氧所致大鼠海马神经元损伤具有明显的保护作用,尤其是高浓度。它通过多靶点、多环节、多途径,提高神经元的存活率,维持神经元细胞结构与功能的完整,提高神经元的抗氧化能力,抑制缺氧复氧损伤所致的神经元凋亡,从而起到了很好的保护作用。

全文目录

中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
符号说明  11-13
前言  13-15
实验材料与试剂  15-25
结果  25-28
讨论  28-44
结论  44-45
附图表  45-52
参考文献  52-60
致谢  60-61
攻读学位期间发表的学术论文目录  61-62
学位论文评阅及答辩情况表  62

益气补肾中药对大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用

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