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猪FTO的组织特异性表达及其调控
作 者: 郭兵
导 师: 赵茹茜
学 校: 南京农业大学
专 业: 基础兽医学
关键词: 猪 FTO 组织分布 母体蛋白限饲 海马 神经元
分类号: S828
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要
FTO (Fat mass and obesity associated)是隶属于依赖α-酮戊二酸和2价铁离子的去甲基化酶超家族的与肥胖相关的基因。FTO相关的研究主要着眼于不同的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)等位基因对体重指数(Body mass index, BMI)的影响以及其去甲基化作用。猪FTO的研究报道较少,迄今尚未见有关FTO蛋白和mRNA在猪主要组织器官中的分布及其调控的资料。因此,本试验旨在研究FTO蛋白在梅山猪主要组织器官中的表达,描述FTO mRNA在仔猪海马中的分布,检测母体蛋白限饲对不同胚(日)龄仔猪海马FTO mRNA和蛋白表达的影响,并通过体外培养的猪原代海马神经元,观察糖皮质激素处理对海马神经元FTO蛋白表达的影响。1猪FTO蛋白的组织特异性表达以及母体蛋白限饲的影响梅山猪母猪分为对照组和蛋白限饲组,从配种到仔猪断奶全程饲喂标准蛋白水平日粮(孕期饲料中蛋白含量为12%,哺乳期为14%)和蛋白缺乏日粮(孕期饲料中蛋白含量为6%,哺乳期为7%),断奶后仔猪统一饲喂标准蛋白水平日粮。采集8月龄子代雄性梅山猪海马、脂肪、肝脏、肌肉四种主要器官和组织,采用蛋白免疫印迹方法检测FTO蛋白的表达。结果显示:FTO蛋白在所检测的四个组织器官中均有不同程度的表达。其中海马表达丰度最高,脂肪和肝脏其次,而肌肉中表达丰度非常低。母体蛋白限饲对所检测的四个组织器官中FTO蛋白的表达均无显著影响。2 FTO mRNA在仔猪海马中的分布及母体蛋白限饲对猪海马中FTO表达的影响分别与妊娠70天、出生当天(1日龄)和断奶当天(35日龄)采集胚胎或仔猪海马。采用荧光原位杂交法检测1日龄仔猪海马中FTO mRNA的分布;使用定量实时荧光PCR方法和蛋白免疫印迹法分别检测FTO mRNA和蛋白在海马中的相对表达量。结果显示FTO mRNA在海马的锥体细胞层有广泛的表达,在胶质细胞未见表达;70胚龄和1日龄蛋白限饲组仔猪海马中FTO mRNA目对于对照组表达显著上调(P<0.05),35日龄仔猪海马中FTO mRNA表达未见显著改变;70胚龄、1日龄和35日龄海马中FTO蛋白的表达也未检测到显著改变。3糖皮质激素处理对原代培养的猪海马神经元FTO蛋白表达的影响选用出生24小时内的雄性仔猪,采集海马分离神经元进行离体培养,待7天神经元分化后用1μM、10μM的皮质醇以及10μM的地塞米松处理4 h。通过MTT法测定细胞活力,利用蛋白免疫印迹检测细胞蛋白匀浆液中FTO的表达量。结果显示:糖皮质激素处理导致海马神经元活力下降(P<0.05)。10μM皮质醇和地塞米松处理导致神经元FTO蛋白表达显著升高(P<0.05)。
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全文目录
摘要 6-8ABSTRACT 8-11引言 11-12第一篇 文献综述 12-34 第一章 FTO及其研究进展 12-20 1 FTO的基因定位和基因结构 12-14 2 FTO的组织特异性表达和生理学功能 14-16 3 FTO与肥胖相关研究进展 16-20 第二章 影响FTO表达的一些因素 20-26 1 品种 20 2 年龄 20-21 3 营养、环境、母体效应 21-22 4 内分泌 22-24 5 猪FTO研究现状 24-26 参考文献 26-34第二篇 实验研究 34-68 第三章 猪FTO蛋白的器官特异性表达及母体蛋白限饲的影响 34-42 1 材料与方法 34-37 2 结果与分析 37-39 3 讨论 39-40 参考文献 40-42 第四章 FTO mRNA在猪海马中的分布及母体蛋白限饲对猪海马中FTO表达的影响 42-58 1 材料与方法 42-48 2 结果与分析 48-53 3 讨论 53-56 参考文献 56-58 第五章 糖皮质激素处理原代培养的猪海马神经元对FTO蛋白表达的影响 58-68 1 材料与方法 58-61 2 结果与分析 61-63 3 讨论 63-66 参考文献 66-68全文结论 68-70致谢 70
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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 猪
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