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藏药三果汤散抗氧化有效成分研究

作　者: 姚喆
导　师: 张艺
学　校: 成都中医药大学
专　业: 药物化学
关键词: 藏药三果汤散抗氧化有效成分薄层色谱-生物自显影结构鉴定
分类号: R29
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

藏药三果汤散由诃子Terminalia chebula Retz.、毛诃子T.billerica (Gaertn.) Roxb以及余甘子Phyllanthus emblica L.组成,具有清除血热、化解坏血的功效。三果汤散作为众多藏药方剂的基础方,在藏医临床上可用于高原疾病的治疗。现代研究表明高原疾病的产生是由于高原缺氧后导致自由基失衡,氧化应激致使细胞凋亡所出现的一系列病理变化。因此,对三果汤散抗氧化有效成分进行如下研究。目的：本论文以藏药三果汤散为研究对象,采用薄层色谱-生物自显影、DPPH法、HPLC等手段,以期对三果汤散抗氧化有效成分进行初步阐释。方法：1、对三果汤散及各单味药进行了显微鉴别。2、采用可见分光光度法对三果汤散及各单味药进行了DPPH自由基清除测定3、采用薄层色谱-生物白显影对三果汤散进行抗氧化薄层鉴别。4、采用硅胶色谱柱、葡聚糖凝胶色谱柱、制备薄层等植物化学分离方法,对抗氧化活性较强的余甘子乙酸乙酯部位的化学成分进行研究,结合1H-NMR、13C-NMR现代波谱技术确定化合物的结构。并对分离得到单体的单体化合物进行了DPPH自由基清除能力测定。5、以单体抗氧化作用较强的没食子酸为指标成分,对三果汤散进行HPLC含量测定。6、采用HPLC对三果汤散体内外指纹图谱进行分析,对三果汤散的入血成分进行了初步分析。结果：1、对三果汤散中的草酸钙结晶、非腺毛、油滴等结构进行了显微鉴别。对《中华人民共和国卫生部药品标准藏药》第一册(1995年)进行了补充完善。2、不同批次三果汤散抗氧化能力差异不大；单味药中诃子、毛诃子及余甘子皆有一定的抗氧化作用。3、三果汤散抗氧化成分薄层鉴别的结果表明没食子酸为三果汤散中的主要化学成分,余甘子乙酸乙酯部位具有较强的抗氧化作用。4、从余甘子的乙酸乙酯部位共分离鉴定得到8个化合物,分别为β—谷甾醇(β-Sitosterol)、β-胡萝卜苷(β-Daucosterol)、桂皮酸(Cinnamic Acid)、没食子酸(Gallic Acid)、没食子酸乙酯(Ethyl Gallate)、鞣花酸(Ellagic Acid)、粘酸-二甲酯-2-O-没食子酸酯(Mucic Acid Dimethyl Ester-2-O-Gallate)、柯里拉京(Corilagin)。单体化合物中没食子酸DPPH自由基清除作用较强。5、建立了三果汤散没食子酸HPLC含量测定方法,其在0.1605～0.6420μg(r=0.9999)范围内,线性关系良好。6、除了对三果汤散中部分化学成分进行了HPLC指纹图谱定性外,三果汤散血清指纹图谱结果表明,没食子酸、柯里拉京等化学成分以原型入血,揭示它们可能是三果汤散体内直接作用物质。结论：没食子酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、柯里拉京都具有较强的体外抗氧化作用,结合血清指纹图谱,初步确定没食子酸、柯里拉京是三果汤散抗氧化有效成分。

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摘要 3-5Abstract 5-7目录 7-9英文缩写词对照表 9化学成分中英文对照表 9-10引言 10-13 一高原病及藏药三果汤散概述 10 二杭氧化成分初步筛选方法 10-11 三三果汤散抗氧化研究 11 四研究思路 11-13第一章藏药三果汤散显微初步鉴别 13-17 1.1 仪器与试药 13-14 1.2 实验方法 14 1.3 实验结果 14-16 1.4 本章小结 16-17第二章藏药三果汤散抗氧化作用初步筛选 17-26 2.1 仪器与试药 17 2.2 实验方法 17-22 2.3 实验结果 22-25 2.4 本章小结 25-26第三章藏药三果汤散抗氧化薄层生物自显影初步研究 26-30 3.1 仪器与试药 26-27 3.2 实验方法 27-28 3.2.1 供试品、对照品DPPH溶液制备 27 3.2.2 方法学考察 27-28 3.3 实验结果 28-29 3.4 本章小结 29-30第四章余甘子抗氧化有效成分分离鉴定 30-42 4.1 实验仪器及材料 30 4.2 乙酸乙酯部位分离纯化流程 30-34 4.3 化合物结构鉴定 34-38 4.4 余甘子各单体成分抗氧化作用测定 38-40 4.5 小章小结 40-42第五章 HPLC测定藏药三果汤散中的没食子酸含量 42-51 5.1 仪器、试剂 42 5.2 色谱条件的选择 42-45 5.3 对照品溶液的制备 45 5.4 标准曲线绘制及相关方法学考察 45-47 5.5 供试品溶液制备方法考察 47-48 5.6 样品重复性实验 48-49 5.7 加样回收率实验 49 5.8 样品的含量测定 49-50 5.9 本章小结 50-51第六章藏药三果汤散指纹图谱初步分析 51-60 6.1 仪器与材料 51 6.2 色谱条件 51 6.3 供试品溶液制备 51-52 6.4 供试品前处理方法研究 52-54 6.4.1 提取溶媒考察 52-53 6.4.2 提取方式考察 53 6.4.3 波长选择 53-54 6.5 方法学考察 54-56 6.6 不同来源三果汤指纹图谱分析及相似度评价 56-58 6.7 三果汤及各单味药化学成分归属指纹图谱分析 58-59 6.8 本章小结 59-60第七章藏药三果汤散血清指纹图谱初步分析 60-64 7.1 仪器、试剂与材料 60 7.2 色谱条件 60 7.3 灌胃样品的的制备 60-61 7.4 血清样品的制备 61-63 7.5 本章小结 63-64第八章结果和讨论 64-66 8.1 结果 64-65 8.2 讨论 65 8.3 创新点 65-66参考文献 66-68综述 68-77 参考文献 74-77附图 77-87致谢 87-88在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果 88-89

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