学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
前手性芳香酮不对称还原的研究
作 者: 孙鹏
导 师: 严群
学 校: 江南大学
专 业: 生物化工
关键词: 芳香酮 不对称还原 4’-氯苯乙酮 产酶条件 (4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲酮 抑制剂 透化处理
分类号: TQ244.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2009年
下 载: 148次
引 用: 1次
阅 读: 论文下载
内容摘要
近年来,随着对不同光学异构体药理作用研究的进展及对消旋药物申报和使用的限制,手性药物的研究和开发已经成为国际新药研究的热点。许多研究者都在致力于研究和开发转化率高、手性选择性好的手性化合物合成路线,其中生物转化法由于其温和的反应条件及高度的手性选择性而受到人们的青睐。手性芳香醇是合成多种手性芳香醇胺类药物的重要中间体。以4’-氯苯乙酮为模型底物,对筛选得到的Candida krusei SW 2026的羰基还原酶产酶条件进行研究。其适宜的发酵培养基组成为甘油50 g/L,玉米浆20 g/L,KH2PO4 4 g/L,MgSO4·7H2O 1.5 g/L,初始pH 6.0;培养条件为温度30 oC,摇床转速200 r/min,发酵周期48 h。此产酶发酵条件下的50 mL发酵液离心得到的菌体在10 mL反应体系中对4’-氯苯乙酮(5 g/L)进行不对称还原反应,产物(S)-4’-氯-1-苯乙醇的产率最高达到88.56 %,e.e.值稳定在87 %左右。对水相中反应的过程控制参数(pH、温度、转速,等)进行了优化,确定了最适反应pH为6.0,温度为30℃,转速为180 r/min;对多种可以作为辅底物的化合物进行筛选,找到适合该菌利用的辅底物为葡萄糖,其最适浓度为5 %;底物浓度5 g/L;菌体浓度为200 g/L(干重60 g/L)。当Candida crusei SW 2026菌体在4℃下,经2 %的CTAB处理20 min,其催化的还原反应在16 h反应结束,比未经处理的提前了8 h,而产率和e.e.值较处理前均未变化。通过添加酶抑制剂来提高全细胞催化反应的立体选择性。水相体系Candida crusei SW 2026细胞催化4’-氯苯乙酮不对称还原反应中添加3 g/L的烯丙醇,产物的e.e.值由85.07 %提高到97.19 %,但是产率由原来的83.67 %下降到52.53 %。对另一含有两个芳香基团的前手性酮底物(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲酮的不对称还原反应中,建立了产物的高效液相色谱分析方法:分析条件:HPLC (Dionex P680), Daicel Chiralcel OB-H (5μm,250 mm×4.6 mm)色谱柱,流动相为正己烷:异丙醇(95:5,V /V),流速0.4 mL /min,柱温38℃,紫外检测波长254 nm,进样量5μL。通过对实验室保藏的菌种进行筛选,证实Candida albicans SW 2022对(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲酮有还原能力。对水相中反应的过程控制参数进行优化,确定了最适转化条件为:温度30℃,转速180 r/min,pH 6.0,辅底物为葡萄糖,最适添加量为5 %(m/V),菌体浓度120 g/L(干重40 g/L),底物浓度5 g/L。并且通过添加0.5 %(m/V)二甲亚砜使产率由开始的85.32 %提高到97.75 %。添加2 g/L选择性抑制剂丙烯醇,产物的光学纯度由30 %左右提高到了35 %,而产率下降到87.42 %。而通过向每升反应体系中添加10 mmol亚硫酸钠来降低反应体系溶氧,同样使产物e.e.值提高到35 %,产率保持在96 %左右。
|
全文目录
摘要 3-4 Abstract 4-8 第一章 引言 8-18 1.1 手性芳香醇及其应用 8-10 1.1.1 制备光学纯芳香醇的意义 8 1.1.2 芳香醇作为手性砌块在制药行业的应用 8-10 1.2 不对称还原法制备手性芳香醇 10-12 1.2.1 不对称合成及其特点 10-11 1.2.2 生物法不对称还原制备手性芳香醇 11-12 1.3 菌种及产酶条件对不对称还原的影响 12-13 1.3.1 菌种筛选 12-13 1.3.2 产酶条件的影响 13 1.4 底物的分子结构对不对称还原的影响 13-14 1.5 转化条件的影响 14-16 1.5.1 辅助底物 14 1.5.2 选择性抑制剂 14-15 1.5.3 细胞透化处理 15 1.5.4 树脂原位吸附 15 1.5.5 添加环糊精改善反应选择性 15-16 1.5.6 反应介质 16 1.6 本文的研究意义与研究内容 16-18 第二章 实验材料与方法 18-21 2.1 实验材料 18-19 2.1.1 菌种 18 2.1.2 主要试剂与仪器 18 2.1.3 培养基 18-19 2.2 实验方法 19-21 2.2.1 菌种培养 19 2.2.2 细胞浓度的测定 19 2.2.3 水相不对称还原反应 19 2.2.4 芳香酮羰基还原酶酶活测定 19-20 2.2.5 产物分析 20-21 第三章 结果与讨论 21-44 3.1 4’-氯苯乙酮不对称还原反应 21-36 3.1.1 菌种的筛选 21 3.1.2 Candida krusei SW 2026 发酵产酶条件的研究 21-27 3.1.3 Candida krusei SW 2026 发酵产酶的时间进程 27 3.1.4 Candida krusei SW 2026 不对称还原4’-氯苯乙酮反应 27-28 3.1.5 Candida krusei SW 2026 对不同卤代芳香酮的不对称还原反应 28 3.1.6 产品的初步鉴定 28-29 3.1.7 pH 对催化4’-氯苯乙酮还原反应的影响 29-30 3.1.8 温度对催化4’-氯苯乙酮还原反应的影响 30 3.1.9 转速对催化4’-氯苯乙酮还原反应的影响 30-31 3.1.10 表面活性剂对催化 31-32 3.1.11 选择性抑制剂对催化4’-氯苯乙酮还原反应的影响 32-33 3.1.12 辅底物对催化4’-氯苯乙酮还原反应的影响 33-34 3.1.13 葡萄糖浓度对不对称还原的影响 34 3.1.14 CTAB 处理酵母细胞对不对称还原的影响 34-35 3.1.15 经CTAB 处理前后的转化时间进程 35-36 3.2 (4-氯苯基)-(吡啶-2-基)甲酮不对称还原反应 36-44 3.2.1 高效液相色谱检测方法的建立 36-38 3.2.2 菌种筛选 38 3.2.3 过程控制参数对反应的影响 38-40 3.2.4 辅底物对还原反应的影响 40-41 3.2.5 添加二甲亚砜对还原反应的影响 41-42 3.2.6 添加丙烯醇对反应的影响 42 3.2.7 添加Na_2SO_3 对反应的影响 42-43 3.2.8 (4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲酮还原反应进程 43-44 结论与展望 44-46 致谢 46-47 参考文献 47-52 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 52
|
相似论文
- 几种酶对植物代谢多环芳烃的影响,X173
- 褐飞虱海藻糖酶特征分析及外源化合物的抑制作用,S433.3
- 圆眼珍珠蛙(Lepidobatrachus laevis)皮肤cDNA文库的构建、筛选及胰蛋白酶抑制剂的原核表达和活性研究,Q78
- 植物源细菌群体感应抑制因子的筛选及其对生物膜形成的影响,Q93
- 莜麦中α-淀粉酶抑制剂的分离纯化与性质研究,S512.6
- 组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A对猪卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响,S828
- 截短型rBTI的表达、纯化及性质研究,R284.1
- 纤溶酶原激活物抑制剂-1在增生性瘢痕和正常皮肤中差异性表达的研究,R622
- rBTI-2的表达及其抗肿瘤活性研究,R730.2
- 氢离子调节通道在肝癌细胞的表达及其功能作用,R735.7
- 1、Bcl-2蛋白小分子抑制剂的合成及其抗肿瘤活性研究 2、羟基酪醇合成新方法的研究,R96
- 巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的选育及其PLA降解酶的研究,X172
- 手性β-氨基醇的制备及其催化的不对称Henry反应和前手性酮的不对称还原反应研究,O643.32
- 新型PTP-1B抑制剂金线莲苷及其衍生物的合成研究,R284.1
- 植物细胞不对称还原间氯苯丙酮的研究,O621.254.2
- 储存稳定的有机/无机杂化聚合物的制备及其在光固化涂料中的应用,TQ630.4
- 羰基还原酶的基因挖掘与催化性能研究,Q814
- 帕瑞昔布钠超前镇痛对颌面外科手术患者围术期疼痛的疗效及安全性评价,R782.054
- P27~(kip1)、Cyclin D1与Skp2在基底细胞癌及其临床病理特征中的表达,R730.2
- 胱抑素C评估慢性肾脏病肾功能损害的临床研究,R692
- 漆酶高产菌选育及竹材木质素降解研究,S795
中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 基本有机化学工业 > 芳香族化合物的生产 > 芳醛、芳酮及其衍生物,醌及其衍生物 > 芳酮及其衍生物
© 2012 www.xueweilunwen.com
|