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氢离子调节通道在肝癌细胞的表达及其功能作用

作　者: 于之昊
导　师: 庹必光
学　校: 遵义医学院
专　业: 消化内科
关键词: 原发性肝癌细胞 V-ATPasec NHE1 氢离子调节通道抑制剂
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


背景和目的：细胞内的pH值的稳定是维持细胞功能所必需的,大多数细胞都有一个狭窄的pH值最适范围。目前研究表明氢离子调节通道V-ATPase和NHE1在肿瘤细胞的pH调节中起着重要的作用。本课题旨在研究氢离子调节通道V-ATPase和NHE1在人原发性肝癌细胞中的表达,以及V-ATPase和NHE1在调节肝癌细胞内pH中的作用,从而为原发性肝癌的治疗提供新的药物靶点。方法：选择正常人的肝脏组织和原发性肝癌手术切除病人的肝癌组织,分为正常肝脏组和肝癌组。运用Real-Time RT-PCR技术和Western-Bolt技术分别检测其中氢离子调节通道V-ATPase和NHE1的mRNA和蛋白表达。运用免疫组化技术,免疫荧光技术检测其中V-ATPc在正常肝细胞和肝癌细胞中的表达及位置。应用正常肝细胞株LO2和肝癌细胞株HePG2、7402进行实验,通过激光共聚焦显微镜细胞内pH测定技术,研究V-ATPase c和NHE1在肝癌细胞内pH调节中的作用。结果：①正常肝组织和肝癌组织氢离子调节通道mRNA表达情况：肝细胞和肝癌细胞中均存在V-ATPase c和NHE1的表达,但肝癌组织中的表达较正常肝组织明显增高。②正常肝细胞和肝癌细胞氢离子相关通道Western-Bolt表达情况：正常肝和肝癌细胞中均存在V-ATPase和NHE1的表达,且肝癌组织中的表达较正常肝组织明显增高。③免疫组化实验发现：V-ATPase c在细胞膜上与细胞浆中都有表达,且肝癌组的表达明显高于正常肝组(P<0.05)。;.④免疫荧光实验发现：V-ATPase c在细胞膜上与细胞浆中都有表达,且肝癌组的表达明显高于正常肝组(P<0.05)。;.⑤正常肝细胞LO2和肝癌细胞HePG2、7402细胞内pH检测情况：正常肝细胞LO2和肝癌细胞HePG2、7402在加入分别V-ATPase和NHE1的阻断剂后H+的回峰速度明显减慢,其中HePG2和7402在被NHE1的阻断剂EIPA阻断后回峰速度下降更为明显。而正常肝细胞LO2在两种阻断剂阻断下无明显差别。结论：(1)正常肝组织和肝癌组织中均存在V-ATPase和NHE1的表达。且肝癌组织中V-ATPase和NHE1的表达增高。(2) V-ATPasec主要分布于肝脏细胞的细胞膜上和细胞浆中,且肝癌细胞中V-ATPase c的表达明显高于正常肝细胞。(3)在肝细胞LO2中V-ATPase和NHE1的作用无明显差异,在肝癌细胞HePG2和7402中NHE1调控H+的运动作用强于V-ATPase。

全文目录


英文缩略词表  4-6
摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-11
材料与方法  11-22
实验结果  22-35
讨论  35-41
结论  41-42
参考文献  42-46
综述  46-56
  参考文献  52-56
致谢  56-57
作者简介  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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