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退变腰椎间盘组织细胞凋亡相关蛋白酶Caspase-6、Caspase-10的表达

作 者: 黄崇友
导 师: 臧晓方
学 校: 中南大学
专 业: 外科学
关键词: 腰椎 椎间盘退变 细胞凋亡 Caspase
分类号: R681.53
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 11次
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内容摘要


目的:通过采用HE染色观察腰椎间盘髓核细胞密度及形态学变化;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labelling, TUNEL)法检测腰椎间盘组织凋亡细胞;用免疫组织化学链霉素卵白素-过氧化物酶(streptoavidin-peroxidose, S-P)法检测髓核内Caspases-10和Caspases-6的表达情况。研究人类不同年龄段退变腰椎间盘细胞凋亡的规律,并分析各个指标间的相互关系,探讨腰椎间盘退变的机制,为将来通过可能的生物学方法防治腰椎间盘退变提供实验依据和治疗策略。材料和方法:患者组:标本均来源于45例住院并接受手术治疗的腰椎间盘突出症病人。标本经病理学证实均为退变椎间盘组织。患者组分为:青年组(年龄44岁以下);中年组(年龄45岁至59岁);老年组(年龄60岁以上)对照组:标本均来源于5例青少年型特发性脊柱侧弯矫形手术患者。所取标本经病理学证实均为正常椎间盘组织。患者组标本均为术中所取出L4/5新鲜椎间盘髓核组织;对照组标本均为术中所取出L2/3新鲜椎间盘髓核组织。采用常规HE染色,观察椎间盘髓核细胞密度及形态学变化。采用TUNEL法检测腰椎间盘髓核中的凋亡阳性细胞率。采用免疫组织化学S-P法检测腰椎间盘髓核中Caspase-10和Caspase-6的表达情况。用PBS代替—抗作为阴性对照。所有数据均应用SPSS16.0统计软件包进行处理,检验水准以P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1.细胞密度:对照组髓核内细胞密度为(8.72±0.66)个/HP。中年、青年、老年患者组髓核内细胞密度分别为(7.21±0.78)个/HP;(5.79±0.60)个/HP;(4.49±0.60)个/HP。四个组两两之间差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞密度与年龄呈负相关(P<0.01)。2. TUNEL阳性细胞率:对照组髓核内TUNEL阳性细胞率为(17.80±0.62)%。青年、中年、老年患者组髓核内TUNEL阳性细胞率分为(45.71±2.05)%;(53.65±2.93)%;(68.39±4.33)%。四个组两两之间差异均有统计学意义(P<0.05)。髓核内TUNEL阳性细胞率与细胞密度之间呈负相关(P<0.01);与年龄呈正相关(P<0.01)。3. Caspase-10的表达:对照组髓核内Caspase-10染色阳性细胞率为(32.60±1.64)%。中年、青年、老年患者组髓核内Caspase-10染色阳性细胞率分别为(50.67±2.89)%;(63.12±4.61)%;(75.28±4.26)%。四个组两两之间差异均有统计学意义(P<0.05)。髓核内Caspase-10染色阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率和年龄之间均呈正相关(P<0.01)。4. Caspase-6的表达:对照组髓核内Caspase-6染色阳性细胞率为(19.32±1.49)%。中年、青年、老年患者组髓核内Caspase-6染色阳性细胞率为(38.58±1.80)%;(53.19±2.67)%;(62.72±4.65)%。四个组两两之间差异均有统计学意义(P<0.05)。髓核内Caspase-6染色阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率和年龄之间均呈正相关(P<0.01)。结论:Capase-6、Caspase-10蛋白酶参与了腰椎间盘组织细胞调亡的调节,Caspase-6和Caspase-10可能与腰椎间盘退行性变有相关性。

全文目录


摘要  4-7
ABSTRACT  7-11
第一章 前言  11-13
第二章 材料与方法  13-18
  2.1 研究材料  13-14
    2.1.1 实验标本  13
    2.1.2 主要试剂  13
    2.1.3 辅助材料  13-14
    2.1.4 设备  14
  2.2 实验方法  14-16
    2.2.1 玻片处理  14
    2.2.2 标本处理  14
    2.2.3 HE染色  14
    2.2.4 TUNEL染色  14-15
    2.2.5 免疫组织化学染色  15-16
  2.3 结果判定  16-17
  2.4 统计学分析  17-18
第三章 结果  18-25
  3.1 HE染色观察腰椎间盘髓核凋亡细胞、凋亡小体和细胞密度  18-19
  3.2 TUNEL染色观察椎间盘髓核凋亡细胞率  19-20
  3.3 腰椎间盘髓核内Caspase-6的表达  20-21
  3.4 腰椎间盘髓核内Caspase-10的表达  21-22
  3.5 年龄与腰椎间盘髓核TUNEL阳性细胞率和细胞密度的关系  22
  3.6 腰椎间盘髓核TUNEL阳性细胞率和细胞密度的关系  22
  3.7 腰椎间盘Caspase-6阳性细胞率与年龄和TUNEL阳性细胞率的关系  22-23
  3.8 Caspase-10阳性细胞率与年龄和TUNEL阳性细胞率的关系  23-24
  3.9 腰椎间盘Caspase-6阳性细胞率与Caspase-10阳性细胞率的关系  24-25
第四章 讨论  25-30
第五章 结论  30-31
附图  31-38
参考文献  38-41
综述  41-55
  参考文献  51-55
致谢  55-56
攻读硕士学位期间主要研究成果  56

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 骨科学(运动系疾病、矫形外科学) > 骨骼疾病 > 脊柱及背疾病 > 脊椎关节病
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