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AG490对人未成熟树突状细胞诱导初始性CD4~+T细胞分化为Treg细胞影响的体外研究

作　者: 郭军华
导　师: 王毅
学　校: 南华大学
专　业: 泌尿外科学
关键词: 未成熟树突状细胞 调节性T细胞 JAK-STAT信号通路 AG490 免疫耐受
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


目的:利用人外周血获得未成熟树突状细胞,通过AG490对人未成熟树突状细胞诱导CD4+T细胞分化为CD4+ CD25+T细胞转化率影响的体外研究,确定JAK-STAT信号传导通路其对CD4+T细胞转化为调节性T细胞的影响,研究人imDC诱导移植免疫耐受机制。方法:抽取一个健康成人肘静脉血50ml,用梯度密度离心法从血液标本中分离单个核细胞(PBMC),在37℃、5 %CO2的条件下,10%FCS RPMI-1640完全培养液培养,加入GM-CSF(100ng/ml)和IL-4(50ng/ml)诱导,每3d半量换液1次,培养7天后收集疏松贴壁细胞。未成熟树突状细胞的鉴定:1)在光镜下和倒置相差显微镜下进行形态学观察,2)利用流式细胞术检测细胞的表面分子标志,3)细胞功能测定。免疫磁珠分选法从另一个体脐血中分离CD4+T细胞,均分为5组细胞:(1)空白组: CD4+T细胞加入等容量RPMI-1640单独培养;(2)混合对照组:imDC与CD4+T细胞以1:10的浓度比例混合培养,不加其他试剂,诱导Treg;(3)低浓度AG490组:imDC与CD4+T细胞以1:10的浓度比例混合培养同时加入终浓度为10μg/mL AG490;(4)中浓度AG490组:imDC与CD4+T细胞以1:10的浓度比例混合培养同时加入终浓度为30μg/mL AG490;(5)高浓度AG490组:imDC与CD4+T细胞以1:10的浓度比例混合培养同时加入终浓度为50μg/mL AG490。再进行混合培养5天,以流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞转化率。结果:(1)imDC的鉴定:在形态学方面,培养至第7天的单个核细胞悬浮生长,表面可见毛刺状突起,体积较前增大。(2)FCM检测Treg细胞的转化率:imDC与CD4+混合培养后, F??攧reg细胞的转化率,结果如下:空白组的Treg细胞转化率为1.74±0.18%,混合对照组的Treg细胞转化率为22.23±0.77%,而低浓度AG490组为22.31±0.82%,中浓度AG490组为41.39±1.87%,高浓度AG490组为42.32±1.18%。低浓度AG490组与混合对照组之间无显著性差异(P值>0.05),中浓度AG490组和高浓度AG490组之间也无显著性差异(P值>0.05),其余各组之间两两比较均有显著性差异(P值<0.05)。结语:(1)人外周血来源的imDC可以诱导CD4+T细胞转化成Treg细胞。(2)JAK2/3信号通路特异性阻断剂AG490可以部分促进CD4+T

全文目录


一、主要缩略语中英文索引(English Abbreviations Induces)  4-6
二、中文摘要(Chinese Abstract)  6-8
三、英文摘要(English Abstract)  8-11
四、正文  11-40
  第一章(Chapter 1 ) 前言(Introduction)  11-16
  第二章(Chapter 2 ) 材料和方法(Materials and Methods)  16-22
  第三章(Chapter 3 ) 结果（Results）  22-32
  第四章(Chapter 4 ) 讨论(Discussion)  32-39
  第五章(Chapter 5 ) 结语(Conclusions)  39-40
五、参考文献(References)  40-43
六、综述(Review)  43-48
七、读研期间发表的论文(Theses)  48-49
八、致谢(Acknowledgements)  49

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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