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骨髓间充质干细胞在同种心脏移植中对Treg细胞作用的实验研究

作　者: 高彦伟
导　师: 沈振亚
学　校: 苏州大学
专　业: 胸心血管外科
关键词: 骨髓间充质干细胞 CD4~+CD25~+Treg细胞 Foxp3 同种心脏移植 免疫耐受
分类号: R654.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:通过建立SD大鼠到Wistar大鼠腹腔心脏移植模型,术前经外周静脉输注骨髓间充质干细胞,研究能否提高受体CD4~+CD25~+foxp3+调节性T细胞(Treg)含量,延长供心存活时间,并结合体外MSCs与CD4+T细胞共培养实验,揭示MSCs对Treg细胞作用的机理。方法:体外部分:采用体外MSCs与CD4+T细胞不同比例共培养,实验分组为:A组(CD4+T单独培养组)、B组(MSCs单独培养组)、C1组(MSCs /CD4+T 1:1)、C2组(MSCs/CD4+T 1:10)、C3组(MSCs/CD4+T 1:100),倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg)的数量及Foxp3蛋白的表达量变化,ELISA方法测定上清液TGF-β1、IL-10、IL-2的变化。体内部分:供体SD大鼠和受体Wistar大鼠各15只随机分成三组,Ⅰ组(空白组):仅行SD大鼠到Wistar大鼠异位同种腹腔心脏移植,在心脏移植前和后不作任何处理。Ⅱ组(输注PBS组):受体Wistar大鼠心脏移植前5天经颈静脉输注PBS。Ⅲ组(移植MSCs组):受体Wistar大鼠心脏移植前第5天经颈静脉输注培养扩增的MSCs。观测指标:供心的存活时间、病理改变,受体Wistar大鼠体内CD4~+CD25~+Treg细胞变化,以及血清TGF-β1、IL-10、IL-2变化等。结果:体外部分: (1)体外实验组CD4~+CD25~+Treg细胞比例及Foxp3蛋白表达检测结果:A组:6.44±0.55%,77.90±2.93%;B组:0±0%,0±0%;C1组:65.98±3.11%,81.99±2.27%;C2组:51.92±1.86%,78.31±3.33%;C3组:30.52±3.40%,78.94±1.00%。CD4~+CD25~+Treg细胞比例检测结果,共培养组(C1、C2、C3)明显高于A组,有统计学差异,P<0.05。Foxp3蛋白表达各组间无明显差异,P>0.05。(2)体外实验组TGF-β1检测结果: A组:110.77±6.55 pg/mL,B组:396.34±6.48 pg/mL,C1组:688.38±9.92 pg/mL,C2组:705.07±6.78 pg/mL,C3组:783.58±19.74 pg/mL。C1、C2、C3组中上清液中TGF-β1浓度较A组、B两组明显升高,P<0.05。C1、C2、C3组之间无显著性差异,P>0.05。(3)体外实验组IL-10检测结果: A组:6.68±0.56 pg/mL,B组:0±0 pg/mL,C1组:50.32±1.55 pg/mL,C2组:52.62±0.80 pg/mL,C3组:69.60±1.55 pg/mL。C1、C2、C3组中上清液中IL-10浓度较A组、B两组明显升高,P<0.05。C1、C2、C3组之间无显著性差异,P>0.05。(4)体外实验组IL-2检测结果: A组:11.98±0.38 pg/mL,B组:0±0 pg/mL,C1组:4.43±0.19 pg/mL,C2组:3.89±0.60 pg/mL,C3组:3.84±0.63 pg/mL。C1、C2、C3组中IL-2浓度较A组、B两组明显降低,有统计学差异,P<0.05。C1、C2、C3组之间无显著性差异,P>0.05。体内部分:(1)供心平均存活时间(MST):Ⅰ组:6.0±0.71天,Ⅱ组:5.8±0.84天,Ⅲ组:17.0±0.71天。Ⅲ组平均存活时间较Ⅰ、Ⅱ组明显延长,有显著性差异,P<0.05。(2)受体外周血CD4~+CD25~+Treg细胞及Foxp3蛋白表达检测结果:Ⅰ组:2.18±0.36%,72.84±1.91%;Ⅱ组:2.46±0.44%,72.48±2.37%;Ⅲ组:8.72±0.68%,73.24±2.78%。CD4~+CD25~+Treg细胞检测结果,C组明显高于A组,有统计学差异,P<0.05。Foxp3蛋白表达各组间无明显差异,P>0.05。(3).受体外周血TGF-β1检测结果:Ⅰ组:165.73±8.43 pg/mL,Ⅱ组:178.75±9.02 pg/mL,Ⅲ组:341.76±13.82 pg/mL。Ⅲ组较Ⅰ、Ⅱ组明显增多,有显著性差异,P<0.05。(4).受体外周血IL-10检测结果:Ⅰ组:16.20±0.61 pg/mL,Ⅱ组:18.81±0.42 pg/mL,Ⅲ组:47.38±1.38 pg/mL。Ⅲ组较Ⅰ、Ⅱ组明显增多,有显著性差异,P<0.05。(5)受体外周血IL-2检测结果:Ⅰ组:90.34±3.43 pg/mL,Ⅱ组:85.90±1.67 pg/mL,Ⅲ组:44.85±3.39 pg/mL。Ⅲ组较Ⅰ、Ⅱ组明显减少,有显著性差异,P<0.05。结论:1、CD4+T与MSCs共培养后,可明显提高CD4~+CD25~+ Treg的比例,且具有MSCs剂量相关性,但对Foxp3蛋白的表达无明显促进作用。2、外周静脉移植骨髓间充质干细胞( MSCs )可以使体内CD4~+CD25~+foxp3+Treg细胞增加,显著延长同种心脏移植物的存活时间。3、MSCs与Treg细胞共同作用,通过下调IL-2,上调IL-10、TGF-β1等免疫抑制因子的表达,从而达到免疫抑制功能

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
前言  10-11
材料和方法  11-20
结果  20-35
讨论  35-44
结论  44-45
参考文献  45-50
综述  50-59
   参考文献  56-59
英汉双解缩略词表  59-60
攻读学位期间公开发表的论文  60-61
致谢  61-63

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