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槲皮素对人膀胱癌细胞EJ的生物活性及其对STAT3信号通路的影响
作 者: 宋兆莹
导 师: 舒晓宏
学 校: 大连医科大学
专 业: 药理学
关键词: 槲皮素 膀胱癌 EJ细胞系 AG490 STAT3 PIAS3
分类号: R737.14
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
目的:研究天然药物单体成分槲皮素对膀胱癌细胞EJ的生物活性,同时探讨STAT3信号通路在膀胱癌中的作用。方法:以人膀胱癌EJ细胞系为研究对象,采用100μM的槲皮素处理EJ细胞后,通过HE染色和台盼蓝计数观察槲皮素对EJ细胞生物活性的影响,并采用流式细胞术(FCM)对其细胞周期进行分析;利用石蜡组织微阵列技术及免疫组织化学染色(IHC)检测信号转导与转录激活因子3 (STAT3)在人膀胱癌组织中的表达情况,并进一步通过HE染色、胎盘蓝计数、FCM及免疫细胞化学(ICC)等技术分析槲皮素和酪氨酸磷酸化抑制剂AG490对EJ细胞中STAT3及STAT3抑制因子(PIAS3)蛋白表达的影响,从而明确STAT3信号通路在膀胱癌发生中的作用。结果:1. HE染色分析100μM槲皮素处理EJ细胞48h后,细胞未出现明显形态改变,细胞生长密集;而采用60μM AG490处理48h后,EJ细胞核呈规则圆形,细胞稀疏。2.台盼蓝计数正常培养组和100μM槲皮素组在0h,12h,24h,36h及48h不同时间点死细胞相近,槲皮素处理后未出现细胞抑制;但60μM AG490在上述时间点对EJ细胞抑制率分别为0.01%、1.2%、25.63%、29.72%和45.55%。3. FCM分析正常培养的膀胱癌EJ细胞的G1、G2、S期的比例分别为24.48%、26.88%、48.25%;经100μM槲皮素处理48h后,膀胱癌EJ细胞的G1、G2、S期的比例分别为35.99%、19.73%、44.27%;而经60μM AG490处理48h后,膀胱癌EJ细胞的G1、G2、S期的比例分别为56.46%、12.86%、30.68%。表明AG490在诱导膀胱癌细胞凋亡的同时,将EJ细胞的细胞周期阻滞在G1期。4.膀胱癌组织中STAT3的IHC检测通过对膀胱癌组织阵列样本进行免疫组织化学方法染色,发现STAT3在膀胱癌组织中多呈阳性表达。在87例膀胱癌组织样本中,STAT3阳性表达率达93.1%,其中阴性6例(6.9%),弱阳性19例(21.8%),阳性23例(26.4%),强阳性39例(44.8%)。5. EJ细胞中STAT3的ICC检测免疫细胞化学结果显示,正常培养条件下,STAT3在EJ细胞胞浆中呈阳性表达,胞核略有表达;槲皮素处理后,STAT3主要在胞浆中表达;经60μM AG490处理48h后,STAT3在胞浆中呈阳性表达,未出现明显核易位现象。6. EJ细胞中PIAS3的ICC检测ICC结果显示,正常培养条件下,PIAS3在EJ细胞胞浆中呈阳性表达,胞核阴性;槲皮素处理后,PIAS3未出现核易位现象,主要在胞浆中表达;而AG490处理组出现明显的核易位现象,胞浆和胞核均呈阳性,同时可看到EJ细胞数目减少,呈现凋亡趋势。结论:1.槲皮素未呈现明显抑制膀胱癌EJ细胞生物活性的作用;2.人膀胱癌组织中STAT3呈高表达趋势;3.槲皮素对EJ细胞中的STAT3信号通路无明显抑制作用;4. AG490和PIAS3通过抑制EJ细胞中STAT3的活化而抑制细胞增殖,表明STAT3信号通路在肿瘤的异常增殖中具有重要作用,提示可通过抑制STAT3信号通路而开发抗膀胱肿瘤药物。
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全文目录
中文摘要 6-8英文摘要 8-10前言 10-11材料和方法 11-16结果 16-21讨论 21-25结论 25-26参考文献 26-28综述 28-39 参考文献 36-39附录 缩略词表 39-40个人简介 40-41致谢 41
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 泌尿器肿瘤 > 膀胱肿瘤
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