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目的:通过建立持续性哮喘大鼠模型,以维生素A的不同给药途径作为干预因素,比较不同时间里哮喘大鼠血中CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+ regulatory T cell ,CD4~+CD25~+Treg)以及血清细胞因子IL-4和IFN-γ的变化,从而了解CD4~+CD25~+Treg在哮喘发病机制中的作用,同时探讨维生素A的不同给药途径对支气管哮喘的免疫调节作用,为维生素A在支气管哮喘中的防治中提供一定的理论根据,。方法:将30只成年雌性SD大鼠在实验第1天和7天两次腹腔注射致敏液1.0ml/只/次(0.08%OVA和液态铝混合液);实验第14天,大鼠雾化吸入1%OVA溶液进行激发,每日一次,每次30分钟,于激发后第8天,30只大鼠随机分成A、B、C三组,A组为维生素A口服组,B组为维生素A滴鼻组,C组为哮喘对照组,每组均10只SD大鼠。三组分别给予以下处理:每天上午照常给予1%OVA雾化进行激发,每日下午A组给予维生素A 50μl灌胃;B组给予维生素A 20μl滴鼻,C组无特殊处理。同时,设定10只雌性SD大鼠为正常对照组,在实验第1天和7天两次腹腔注射1.0ml/只/次(0.9%NaCl);实验第14天,大鼠雾化吸入0.9%NaCl溶液,每日一次,每次30分钟,处理时间和频次与哮喘相同。在实验的第21天、第35天和第42天分批取材,眼眶静脉丛取血50μl,以流式细胞仪进行CD4~+CD25~+调节性T细胞检测;并用ELISA法进行IL-4和IFN-γ检测。结果:(1)CD4~+CD25~+Treg检测结果:在实验的第21天,哮喘组CD4~+CD25~+Treg明显低于正常对照组,两者差异有统计学意义(P<0.01);在实验的第35天,维生素A口服组的CD4~+CD25~+Treg和维生素A滴鼻组相比,差异无统计学意义(P>0.05);维生素A口服组和滴鼻组的CD4~+CD25~+Treg与哮喘对照组相比较,均有升高,经统计学处理,组间均无统计学差异(P>0.05);在实验的第42天,维生素A口服和滴鼻组的CD4~+CD25~+Treg与哮喘对照组相比较,均有明显升高,经统计学处理,组间均有统计学差异(P<0.05);(2)细胞因子检测结果:在实验的第21天,哮喘组检测得IFN-γ、IL-4水平与正常对照组相比,有显著性差异,经统计学处理,差异有统计学意义(P<0.01);在实验的第35天,维生素A口服和滴鼻组的IFN-γ、IL-4与哮喘对照组相比较,均有升高,经统计学处理,组间均无统计学差异(P>0.05);在实验的第42天,维生素A口服和滴鼻组的IFN-γ、IL-4与哮喘对照组相比较,均有明显升高,经统计学处理,组间均有统计学差异(P<0.05)。结论:(1)哮喘大鼠血清中CD4~+CD25~+Treg的数量较正常对照组减低。(2)哮喘大鼠血清中IL-4的数量较正常对照组升高;哮喘大鼠血清中IFN-γ的数量较正常对照组降低。(3)口服和滴鼻维生素A均可使大鼠血清中CD4~+CD25~+Treg的数量轻度增高。(4)口服和滴鼻维生素A均可使哮喘大鼠血清中的IL-4轻度降低,以及IFN-γ的数量轻度增高。(5)滴鼻给药的大鼠血清中CD4~+CD25~+Treg的数量较口服组轻度升高。(6)滴鼻给药的哮喘大鼠血清中的IL-4较口服给予组轻度降低,以及IFN-γ的数量较口服给予组轻度增高。
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