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培养液成分变化对原头蚴体外培养的影响

作　者: 袁丽英
导　师: 岳城；张壮志；张文宝
学　校: 新疆农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 培养液成分原头蚴体外培养发育影响
分类号: S852.734
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

细粒棘球蚴（Echinococcosis Cyst）是以包囊形式在人和其它中间宿主的内脏器官中生长,由囊壁和内含物（生发囊、原头蚴、子囊、孙囊和囊液等）组成。原头蚴在不同宿主体内发育分化方向不同:在绵羊和人体内,原头蚴向无性繁殖方向分化,形成包囊;在犬科动物体内,原头蚴向有性繁殖方向分化,形成产卵的成虫。本研究分别用三组培养液（Ⅰ组:含10%囊液的RPMI-1640培养液;Ⅱ组:含10%犊牛血清的RPMI-1640培养液;Ⅲ组:纯RPMI-1640培养液）将采集的新鲜原头蚴,按相同浓度在37℃、5%CO₂条件下体外培养15天。在培养后的第3、9和15天观察原头蚴生长发育情况。结果表明:不同培养时间、不同培养液成分对原头蚴生长发育有一定影响。其中,Ⅱ组原头蚴形态变化最明显,新陈代谢旺盛;Ⅰ组部分原头蚴仍处于休眠状态,但成活率最高;Ⅲ组原头蚴发育状况介于其他两组之间。结论:犊牛血清能促进原头蚴生长发育,囊液则抑制原头蚴的生长发育。以未培养原头蚴为对照、ActinⅠ为内参基因,eg143、egTPx和ePC1为检测基因对上述3组培养15天的原头蚴进行real-time PCR扩增。结果表明:egTPx和eg143在Ⅱ组原头蚴中表达量最高,ePC1在Ⅰ组培养的原头蚴中表达量最高（是对照组的2.1倍）。结论:egTPx、eg143基因功能与原头蚴生长发育有关,而ePC1基因功能与原头蚴生长发育的抑制性有关。以未培养原头蚴为对照,用三种高免血清（Eg143血清、EgTPx血清和EPC1血清）对上述3组培养15天的原头蚴进行Western-blot检测。结果表明:EgTPx和Eg143在4组原头蚴中均获表达,EPC1仅在Ⅱ组的原头蚴中未获表达,在其余三组中则全部表达。结论:EgTPx和Eg143蛋白与原头蚴的生长发育有关,EPC1蛋白与原头蚴生长发育的抑制性相关。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第一章细粒棘球蚴的研究概况  8-17
  1.1 包虫病的危害  8
  1.2 细粒棘球绦虫的生活史  8-9
  1.3 不同时期虫体的形态结构  9-10
  1.4 包虫病的流行原因  10-11
  1.5 细粒棘球绦虫的基因型  11
  1.6 包虫病的防治和疫苗的研究现状  11-13
  1.7 与原头蚴生长相关的基因  13-14
  1.8 原头蚴体外培养的研究  14-16
  1.9 本研究的目的与意义  16-17
第二章细粒棘球蚴-原头蚴的体外培养及发育研究  17-26
  2.1 材料与方法  17-20
  2.2 结果与分析  20-24
  2.3 讨论  24-25
  2.4 小结  25-26
第三章应用real-time PCR对不同组份培养基体外培养的原头蚴表达基因的研究  26-39
  3.1 材料与方法  26-31
  3.2 结果与分析  31-37
  3.3 讨论  37-38
  3.4 小结  38-39
第四章应用Western-blot检测不同成分培养液培养的原头蚴的蛋白表达  39-47
  4.1 材料与方法  39-42
  4.2 结果与分析  42-45
  4.3 讨论  45-46
  4.4 小结  46-47
第五章结论  47-48
参考文献  48-52
附录  52-54
致谢  54-55
作者简介  55

培养液成分变化对原头蚴体外培养的影响

内容摘要

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