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颐和园古树组培快繁及端粒酶活性研究

作　者: 王雅群
导　师: 卢存福
学　校: 北京林业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 颐和园 古树 组织培养 端粒酶 衰老
分类号: Q943.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 87次
引　用: 2次
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内容摘要


古树名木是大自然经过漫长的历史变迁,留给人类的宝贵遗产,具有重要的科学、文化和经济价值。为了传承历史文化,留传历史园林植物的宝贵遗传种质资源,本文以北京颐和园古树嫩枝及叶片为外植体进行组织培养试验研究,优化植物端粒酶活性测定方法,并研究了不同组织树木端粒酶的活性。以7种古树为材料,研究其组织培养的技术体系,主要结果:1、取颐和园西堤古柳外植体带有侧芽的茎条切段进行组织培养,以MS为基本培养基,附加不同浓度的6-BA和NAA进行分化诱导,其中最适启动培养基为不添加任何激素的MS培养基(2.0%蔗糖);最适不定芽诱导培养基及激素配比为MS+6-BA0.8 mg/L+NAA0.2mg/L+3.0%蔗糖;不定根最适诱导培养基为1/2 MS+NAA0.2 mg/L+1.5%蔗糖;2、取古楸带有侧芽的嫩茎条切段为外植体进行组织培养,其中最适启动培养基为MS+6-BA0.8 mg/L+NAA0.1 mg/L;最适分化培养基MS+6-BA1.8 mg/L+NAA0.3mg/L;不定根最适诱导培养基为1/2MS+IBA0.3 mg/L+NAA0.05 mg/L;3、取西府海棠当年新生嫩茎条切段为外植体进行组织培养,其中最适不定芽启动培养基1/2MS+IBA0.3 mg/L+NAA0.05 mg/L,将无菌苗接种到分化培养基MS+6-BA1.0 mg/L,+NAA 0.1 mg/L和MS+6-BA1.5 mg/L+NAA 0.4 mg/L上交替培养,组培苗生长健壮且分化率高,不定根最适诱导培养基为1/2MS+IBA0.80 mg/L和1/2MS+NAA1.00 mg/L;4、其余古桑、玉兰、木瓜、柿树生根较困难或者褐化现象严重,完整的组培体系正在建立中。古树随着年龄的增长逐渐走向衰老,而端粒长度、端粒酶活性与衰老密切相关。本文以人体宫颈癌细胞端粒酶活性测定技术为基础,优化了植物端粒酶活性测定方法,即21bp引物适合且使用量均为0.1μg,模板使用量最适为50ng-500ng,端粒DNA反应条件为26℃延长45min,PCR循环条件为:94℃/30s,65℃/30s,72℃/90s,循环33次。引物设计及实验结果表明,植物分生能力强的部位表现端粒酶活性;设计实验提高检测的灵敏度,排出了假阴性结果,改进的银染法使得实验结果更精确。作者对古楸树新生顶芽、组培苗以及古楸树愈伤组织的端粒酶活性进行比较,结果表明衰老、树龄与端粒酶活性可能存在一定的相关性。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-6
缩略词表  6-10
1 引言  10-32
  1.1 古树衰老的原因及其保护复壮措施  10-12
    1.1.1 古树名木衰老的原因  10
    1.1.2 保护古树名木的意义  10-11
    1.1.3 促进古树复壮措施的探讨  11-12
  1.2 木本植物组织培养技术研究进展  12-18
    1.2.1 影响木本植物组织培养研究的有关因子及进展  13-17
    1.2.2 愈伤组织及胚状体的培养  17-18
    1.2.3 展望  18
  1.3 端粒和端粒酶及其与衰老关系研究进展  18-30
    1.3.1 端粒  18-19
    1.3.2 植物细胞端粒的结构和功能  19-22
    1.3.3 端粒酶  22-24
    1.3.4 端粒和端粒酶在植物生长发育中的调控作用  24-26
    1.3.5 衰老的生物学标志  26-27
    1.3.6 端粒和端粒酶与衰老  27-29
    1.3.7 结语和展望  29-30
  1.4 本研究的提出及意义  30-32
2 颐和园古树组织培养  32-56
  2.1 实验材料与方法  32-33
    2.1.1 实验材料  32
    2.1.2 实验试剂  32
    2.1.3 材料处理  32
    2.1.4 实验方法  32-33
    2.1.5 培养条件及培养基  33
  2.2 结果与分析  33-56
    2.2.1 西提古柳的组培结果  33-38
    2.2.2 古楸树组织培养结果  38-43
    2.2.3 西府海棠组培培养结果  43-49
    2.2.4 木瓜组织培养结果  49-53
    2.2.5 玉兰组织培养结果  53-54
    2.2.6 柿树组织培养结果  54-56
3 一种优化的端粒酶活性测定方法  56-88
  3.1 人宫颈癌细胞Hela端粒酶的测定  57-67
    3.1.1 实验材料  57-58
    3.1.2 实验方法  58-67
  3.2 在植物材料中测定端粒酶活性的方法  67-70
    3.2.1 实验材料  67-68
    3.2.2 实验方法  68-70
  3.3 结果与分析  70-85
    3.3.1 提取液蛋白含量的测定结果  70
    3.3.2 端粒酶活性的测定结果  70-85
  3.4 讨论  85-88
4 树木不同组织及盐胁迫下端粒酶活性的变化  88-96
  4.1 实验材料  88-89
    4.1.1 仪器设备  88
    4.1.2 植物材料  88
    4.1.3 引物序列  88
    4.1.4 主要试剂  88-89
  4.2 实验方法  89-91
    4.2.1 植物端粒酶蛋白提取  89
    4.2.2 抽提液中蛋白含量的测定  89
    4.2.3 端粒酶活性测定-端粒重复序列扩增法(TRAP)反应  89-90
    4.2.4 PAGE-银染检测  90-91
  4.3 结果与分析  91-94
    4.3.1 提取液蛋白含量的测定  91
    4.3.2 古楸树不同年龄端粒酶活性比较  91-93
    4.3.3 盐胁迫下沙冬青端粒酶活性  93-94
  4.4 讨论  94-96
5 结论及进一步研究的设想  96-98
  5.1 结论  96-97
    5.1.1 颐和园古树的扩繁  96
    5.1.2 植物端粒酶活性测定方法优化  96
    5.1.3 古楸树不同树龄端粒酶活性比较  96-97
  5.2 进一步研究的设想  97-98
参考文献  98-106
附录Ⅰ  106-107
个人简介  107-108
导师简介  108-109
致谢  109

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学 > 植物细胞的离体培养
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