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塞来昔布、丁酸钠对结肠癌HCT-116细胞增殖影响的实验研究

作　者: 刘文新
导　师: 王朝晖
学　校: 大连医科大学
专　业: 内科学
关键词: 塞来昔布 丁酸钠 COX-2 端粒酶 大肠癌
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:研究非甾体类抗炎药(NSAIDs)与丁酸钠对人结肠癌细胞株HCT-116增殖的影响及可能的作用机制。方法:取结肠癌HCT-116细胞株进行传代培养,调整至对数生长期。取对数生长期细胞,1.0×104/孔浓度接种于96孔板,每孔100ul,培养2天后,吸去培养液,分别加塞来昔布100 umol/L、200 umol/L、400 umol/L,丁酸钠0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L, 100 umol/L塞来昔布+ 0.5mmol/L丁酸钠各200ul。结肠癌HCT-116细胞经上述不同因素处理后继续培养24、48、72h,应用MTT比色法分析各组药物对细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测细胞周期分布;应用RT-PCR检测结肠癌HCT-116细胞株COX-2及端粒酶催化亚基的表达及各药物组对COX-2及端粒酶催化亚基水平的影响。结果:1. MTT比色法结果显示塞来昔布、丁酸钠可明显抑制结肠癌HCT-116细胞的生长,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,抑制作用明显增强(P<0.05),塞来昔布与丁酸钠联合用药比单用塞来昔布或丁酸钠抑制细胞增殖效果更明显(P<0.05)。2.流式细胞结果显示塞来昔布、丁酸钠单独干预结肠癌HCT-116细胞48h,G0/G1期细胞比例上升,S期比例下降,且随着塞来昔布、丁酸钠浓度的升高,G0/G1期细胞比例上升、S期比例下降更加明显;两药联合干预结肠癌HCT-116细胞48h,G0/G1期比例增加、S期比例降低较单用药物更明显。经统计学分析,各用药组G0/G1期比例增加、S期比例降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),塞来昔布与丁酸钠联合用药组较单用药组比较,差异亦有统计学意义(P<0.05)。3.结肠癌HCT-116细胞株COX-2mRNA及hTERTmRNA呈高表达,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳各出现一条阳性条带,与标准DNA Marker比较可知分别329bp的hTERT基因及305bp的COX-2基因。对照组相比,随着塞来昔布浓度的升高, COX-2mRNA表达量逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。丁酸钠组亦表现相同特征。塞来昔布与丁酸钠联合用药组COX-2mRNA表达量低于单用药组(P<0.05)。与对照组相比,随着塞来昔布浓度的升高,hTERTmRNA表达量逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。丁酸钠组亦表现相同特征。塞来昔布与丁酸钠联合用药组hTERTmRNA表达量低于单用药组(P<0.05)。结论:1塞来昔布、丁酸钠对体外培养的结肠癌细胞HCT-116有明显的增殖抑制作用,抑制作用随着时间的延长和浓度的增加逐渐增强。塞来昔布与丁酸钠联合应用具有协同抑制细胞增殖的效应。细胞周期阻滞可能是塞来昔布与丁酸钠抑制HCT-116细胞体外生长的机制之一。2.塞来昔布与丁酸钠对结肠癌细胞的增殖抑制作用可能与通过抑制COX-2及端粒酶的表达从而阻滞细胞周期进展有关。

全文目录


一、摘要  6-10  （一） 中文摘要  6-8  （二） 英文摘要  8-10二、正文  10-29  （一） 前言  10-11  （二） 材料与方法  11-15  （三） 结果  15-21  （四） 讨论  21-25  （五） 结论  25-26  （六） 参考文献  26-29三、综述  29-37  （一） 正文  29-33  （二） 参考文献  33-37四、致谢  37

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肠肿瘤 > 结肠肿瘤
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