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外源性血管紧张素Ⅱ诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化的实验研究

作　者: 罗彦妮
导　师: 沈岳飞
学　校: 广西医科大学
专　业: 神经病学
关键词: 神经干细胞分化多巴胺能神经元血管紧张素Ⅱ
分类号: R741
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:在体外成功分离培养并扩增神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的基础上,本实验通过研究外源性血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)不同剂量、不同诱导持续时间作用下NSCs向多巴胺(dopamine,DA)能神经元分化的情况,进一步了解NSCs体外分化条件,为提高DA能神经元的分化效能奠定细胞学基础。方法:(1)分离培养新生1天SD大鼠脑组织NSCs,通过传代培养扩增来检测自我更新能力,免疫细胞化学法检测NSCs特异性标志物神经上皮干细胞蛋白(neuroepithelial stem cell protein,Nestin)的表达和NSCs分化成为神经元、神经胶质细胞的能力,即分化细胞中神经元特异性烯醇化酶(neuron special enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidicprotein,GFAP)及2,3-环核苷酸二脂酶(cyclic necleotide phosphohydrolase,CNP)的表达;(2)对第二代NSCs进行外源性AngⅡ诱导分化,分相同诱导持续时间(10天)不同剂量(100～800nmol/L)、相同剂量(400 nmol/L)不同诱导持续时间(10～21天)诱导。终止诱导后,免疫细胞化学法检测GFAP及DA能神经元标志物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达情况,半定量RT-PCR(semi-quantity RT-PCR,SQ-PCR)测定分化细胞中THmRNA的相对表达量。结果:(1)体外分离培养的细胞在NSCs培养液中,以神经球形式悬浮生长,扩增传代后子代细胞比原代细胞纯度增加,神经球表达Nestin,分化细胞表达NSE、GFAP和CNP,说明所分离培养的细胞有自我更新、增殖、分化为神经细胞的能力;(2)外源性AngⅡ诱导下能提高NSCs向TH阳性细胞分化的比率,THmRNA相对表达量亦增加,以AngⅡ浓度为400nmol/L及600nmol/L的诱导效果最显著,TH阳性细胞率分别为10.77%和11.34%,TH mRNA相对表达量分别为0.4023±0.0515和0.3971±0.0319,两组组间比较没有统计学差异(P＞0.05);(3)相同剂量AngⅡ(400nmol/L)不同诱导持续时间,以诱导持续17天时分化细胞中TH阳性细胞率及THmRNA相对表达量最高,分别为15.64%、0.5047±0.0212;(4)400nmol/LAngⅡ组细胞中GFAP阳性细胞率高于对照组,有统计学差异(P＜0.05)。结论:(1)体外分离培养的细胞克隆符合神经干细胞生物学属性;(2)体外对神经干细胞进行诱导分化,结果显示外源性AngⅡ能促进DA能神经元分化,在400～600nmol/L浓度范围内AngⅡ的诱导效能最显著;(3)外源性AngⅡ诱导NSCs分化成DA能神经元存在分化的时间效应,诱导持续达17天时分化的细胞中DA能神经元的比例最高。(4)AngⅡ促进NSCs向DA能神经元分化的机制可能与同时促进星型胶质细胞(Astrocyte,AS)分化有关。

全文目录

缩略词及英汉对照  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
一、论文:外源性血管紧张素Ⅱ诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化的实验研究  9-45
  1、前言  9-11
  2、材料与方法  11-24
  3、结果  24-34
  4、讨论  34-40
  5、结论  40-41
  6、参考文献  41-45
二、综述:多巴胺能神经元保护的研究进展  45-55
  1、正文  45-51
  2、参考文献  51-55
三、研究生期间完成的论文和参与的科研  55-56
四、致谢  56

外源性血管紧张素Ⅱ诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化的实验研究

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