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阴道毛滴虫核酶嵌合型病毒载体FRzS的构建

作　者: 张建坤
导　师: 李淑红
学　校: 吉林大学
专　业: 病原生物学
关键词: 阴道毛滴虫病毒载体锤头状核酶
分类号: R382.21
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 26次
引　用: 1次
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内容摘要

本研究用肝浸汤培养基对阴道毛滴虫携病毒株进行了体外纯培养;将包含两个铁氧化还原蛋白短臂的锤头状核酶插入到阴道毛滴虫病毒稳定转染载体pTVV289/NEO+MCS/TVV174中,构建了核酶嵌合型阴道毛滴虫病毒载体FRzS(为短反义序列,上游24nts,下游19nts);经体外转录电穿孔的方法转染到阴道毛滴虫体内,通过虫体计数、光学显微镜观察的方法观察其对虫体的影响。结果显示,阴道毛滴虫滋养体在转染后4d内,转染虫体数量显著低于正常对照组(P<0.01);显微镜观察显示转染虫体变形。表明核酶嵌合型阴道毛滴虫病毒载体FRzS对虫体的生长、细胞形态均有显著影响。本试验成功构建了阴道毛滴虫核酶嵌合型病毒载体FRzS,为进一步研究Fd蛋白在阴道毛滴虫体内的生理功能提供了途径,为阴道毛滴虫病毒载体在毛滴虫细胞生物进化和分子生物学等研究中的应用奠定了基础。

全文目录

内容提要  4-7
英文缩写词表  7-8
第1章绪论  8-17
  1.1 前言  8-9
  1.2 阴道毛滴虫病毒及载体的研究进展  9-17
    1.2.1 阴道毛滴虫病毒的研究进展  9-14
    1.2.2 阴道毛滴虫病毒载体的研究进展  14-17
第2章阴道毛滴虫携病毒株体外纯培养  17-22
  2.1 材料与方法  17-18
    2.1.1 材料  17
    2.1.2 方法  17-18
  2.2 结果  18-19
    2.2.1 阴道毛滴虫的形态观察  18-19
  2.3 讨论  19-21
  2.4 小结  21-22
第3章构建阴道毛滴虫核酶嵌合型病毒载体FRZS  22-32
  3.1 材料与方法  22-26
    3.1.1 材料  22-23
    3.1.2 方法  23-26
  3.2 结果  26-29
    3.2.1 阴道毛滴虫总核酸的提取  26-27
    3.2.2 目的片段的扩增  27-28
    3.2.3 病毒载体的双酶切  28-29
    3.2.4 重组质粒的构建  29
  3.3 讨论  29-31
  3.4 小结  31-32
第4章阴道毛滴虫核酶嵌合型病毒载体FRZS 对虫体的影响  32-39
  4.1 材料与方法  32-34
    4.1.1 材料  32-33
    4.1.2 方法  33-34
  4.2 结果  34-37
    4.2.1 重组质粒FRzS 线性化  34-35
    4.2.2 显微结构观察  35-36
    4.2.3 总RNA 的提取  36
    4.2.4 PCR 扩增  36-37
    4.2.5 细胞计数  37
  4.3 讨论  37-38
  4.4 小结  38-39
第5章结论  39-40
参考文献  40-45
附录  45-46
致谢  46-47
中文摘要  47-48
ABSTRACT  48-49

阴道毛滴虫核酶嵌合型病毒载体FRzS的构建

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