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用于防龋DNA疫苗粘膜传递的有效载体的研究

作　者: 高莉
导　师: 刘卫
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物制药工程
关键词: 非病毒载体阳离子脂质体阳离子脂质乳剂鱼精蛋白防龋DNA疫苗
分类号: R392.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

核酸疫苗等基因药物为亲水性的大分子,容易被降解,不宜直接作为药物使用,因此需要借助合适的载体传递。近年来纳米技术在药物传递中备受研究者的青睐,在基因治疗中也被广泛应用。纳米传递系统中研究较为成熟的是阳离子脂质体。在本论文中,我们首先制备了DOTAP/DOPE脂质体;其次加入一种油相发展成阳离子脂质乳剂,将这两种阳离子脂质载体与DNA孵育得到相应的复合物;最后引入鱼精蛋白,又得到阳离子脂质载体/鱼精蛋白/DNA的三元复合物。主要工作如下:(1)采用薄膜超声法制备阳离子脂质体,采用探头超声法制备阳离子脂质乳剂,对空白脂质体和脂质乳剂的粒径、zeta电位、形貌和稳定性进行考察。结果表明制备工艺有较好的重复性,空白载体稳定性较好。(2)制备了阳离子脂质体/DNA复合物、阳离子脂质乳剂/DNA复合物、阳离子脂质体/鱼精蛋白/DNA复合物、阳离子脂质乳剂/鱼精蛋白/DNA复合物。表征结果显示N/P在2以上时,DNA与阳离子脂质载体形成稳定且带正电的复合物;核酸酶切保护实验结果表明复合物能较好地保护DNA抵御核酸酶的降解。我们还对高浓度复合物的制备方法进行了研究。(3)我们将4种复合物分别对CHO-K1细胞进行转染和MTT细胞毒性评价,结果表明复合物的细胞毒性较小,转染的最佳N/P比为2,阳离子脂质体的转染率要远高于阳离子脂质乳剂,鱼精蛋白能适当提高转染率,血清对两种载体系统均有负面影响。(4)在Balb/c小鼠上进行防龋DNA疫苗的免疫应答评价。结果显示加入鱼精蛋白后抗体表达水平提高约3-4倍,与体外实验相比乳剂与脂质体组的表达差距明显减小。综上所述,DOTAP/DOPE阳离子脂质体、阳离子脂质乳剂与DNA通过静电作用自组装形成复合物,分别加入鱼精蛋白后得到三元复合物,这4种复合物均能介导基因的体外转染和体内表达。结果显示乳剂在体内应用时具备一定潜质,而且鱼精蛋白对体外转染率和体内表达均有增效作用,值得进一步研究考察。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
1 绪论  10-24
  1.1 前言  10-11
  1.2 粘膜免疫  11-21
  1.3 影响非病毒基因载体转染效率的因素  21-22
  1.4 非病毒载体的毒性问题  22-23
  1.5 本文研究目的及主要内容  23-24
2 阳离子脂质载体制备工艺及表征  24-33
  2.1 引言  24
  2.2 材料和方法  24-27
  2.3 结果和讨论  27-32
  2.4 本章小结  32-33
3 阳离子脂质载体  33-43
  3.1 引言  33
  3.2 材料和方法  33-35
  3.3 结果和讨论  35-42
  3.4 本章小结  42-43
4 体外细胞学评价研究  43-56
  4.1 引言  43-44
  4.2 材料和方法  44-49
  4.3 结果和讨论  49-55
  4.4 本章小结  55-56
5 体内免疫效果研究  56-65
  5.1 引言  56-58
  5.2 材料和方法  58-62
  5.3 结果和讨论  62-63
  5.4 本章小结  63-65
6 全文总结  65-68
  6.1 本论文主要研究结果  65-66
  6.2 本论文创新之处  66
  6.3 展望  66-68
致谢  68-69
参考文献  69-75

用于防龋DNA疫苗粘膜传递的有效载体的研究

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