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运动对AMPK不同基因型小鼠骨骼肌MEF2-GLUT4的影响
作 者: 龚豪杰
导 师: 张缨
学 校: 北京体育大学
专 业: 运动人体科学
关键词: AMPKα2 MEF2A GLUT4 高表达 敲除
分类号: G804.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 62次
引 用: 1次
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内容摘要
大量研究表明MEF2是GLUT4蛋白转录过程的必需因子,运动通过提高MEF2/GLUT4 DNA结合活性而提高GLUT4基因和蛋白的表达,但机制尚不清楚。本文旨在通过研究四周耐力训练对AMPKα2高表达转基因和AMPKα2基因敲除鼠,骨骼肌总MEF2含量,核内MEF2含量,MEF2/GLUT4 DNA结合活性以及GLUT4表达的影响,探讨运动提高骨骼肌MEF2/GLUT4 DNA结合活性及GLUT4基因和蛋白的表达可能机制。方法:C57BL/6J野生小鼠、AMPK a 2高表达转基因和AMPK a 2基因敲除鼠各20只,按体重各随机分为2组:安静对照组,耐力训练组,共6组,每组10只。耐力训练组小鼠训练设计为0坡度跑台运动,跑台速度为12m/min,每天训练一个小时,每周六天,持续四周。训练组小鼠最后一次训练后12小时取材。Western blot法测定AMPK (THr72)磷酸化水平、总MEF2、核内MEF2、GLUT4蛋白含量。CHIP法测定MEF2/GLUT4 DNA结合活性。Real-Time PCR法测定GLUT4mRNA含量。结果:野生鼠四周耐力训练后,GLUT4基因表达量显著增加的同时伴随着MEF2/GLUT4 DNA结合活性的显著增加,为运动通过提高MEF2 DNA结合活性而提高GLUT4表达提供了进一步的证据。AMPKα2高表达转基因鼠四周耐力训练后,AMPKα(THr172)磷酸化水平,核内MEF2蛋白表达,MEF2/GLUT4 DNA结合活性,GLUT4基因和蛋白表达量均显著高于野生鼠,提示了“运动-AMPK激活-核内MEF2表达增多-MEF2-GLUT4DNA结合活性增加-GLUT4基因和蛋白表达增多”这样一条通路的存在。虽然四周耐力训练后AMPKα2基因敲除小鼠AMPKα(THr172)磷酸化水平及核内MEF2含量均显著低于野生鼠,但MEF2/GLUT4 DNA结合活性以及GLUT4基因和蛋白含量与野生鼠相比无显著差异,提示了在AMPK a 2基因缺失情况下,运动还可以募集其他的信号通路代偿AMPK a 2对MEF2/GLUT4 DNA结合活性以及GLUT4基因和蛋白含量的调节作用。
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全文目录
摘要 5-6 ABSTRACT 6-9 1 前言 9-10 2 文献综述 10-25 2.1 GLUT4概述 10-13 2.1.1 GLUT4的组织分布 10 2.1.2 GLUT4的结构特征 10-12 2.1.3 运动与GLUT4 12-13 2.2 MEF2的概述 13-17 2.2.1 MEF2结构特征 13-15 2.2.2 MEF2生物学作用 15-16 2.2.3 运动与MEF2/GLUT4 DNA结合活性 16-17 2.3 AMPK概述 17-21 2.3.1 AMPK的结构及表达 17-18 2.3.2 AMPK的活性调节 18-19 2.3.3 AMPK激酶,激活剂和抑制剂的研究 19-20 2.3.4 运动与AMPK 20-21 2.4 AMPK对GLUT4转位调节作用 21-22 2.5 AMPK对MEF2/GLUT4 DNA结合活性及GLUT4基因蛋白表达的调节作用 22-25 3 研究方法 25-30 3.1 研究对象 25-26 3.2 运动方案和取材 26 3.3 仪器、试剂与指标测定方法 26-29 3.3.1 mRNA表达 26-27 3.3.2 蛋白表达 27-28 3.3.3 MEF2/GLUT4 DNA结合活性 28-29 3.4 数据统计 29-30 4 研究结果 30-34 4.1 耐力训练对小鼠骨骼肌AMPKα(THR172)磷酸化水平的影响 30 4.2 耐力训练对小鼠骨骼肌细胞总MEF2和核内MEF2蛋白表达量的影响 30-32 4.3 耐力训练对小鼠骨骼肌细胞核内MEF2与GLUT4 DNA结合活性的影响 32 4.4 耐力训练对小鼠Glut4基因和蛋白表达量的影响 32-34 5 分析与讨论 34-39 5.1 耐力训练对AMPK三种不同基因状态鼠骨骼肌AMPK α(THR172)磷酸化水平的影响 34 5.2 耐力训练对AMPK三种不同基因状态鼠骨骼肌MEF2/GLUT4 DNA结合活性的影响 34-37 5.3 耐力训练对AMPK三种不同基因状态鼠骨骼肌细胞总MEF2及核内MEF #2蛋白表达的影响 37-39 6 结论 39-40 致谢 40-41 参考文献 41-48 附录 48-49 个人简历 在读期间发表的学术论文与研究成果 49
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中图分类: > 文化、科学、教育、体育 > 体育 > 体育理论 > 体育基础科学 > 运动生物化学
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