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运动对AMPK不同基因型小鼠骨骼肌MEF2-GLUT4的影响

作 者: 龚豪杰
导 师: 张缨
学 校: 北京体育大学
专 业: 运动人体科学
关键词: AMPKα2 MEF2A GLUT4 高表达 敲除
分类号: G804.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 62次
引 用: 1次
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内容摘要


大量研究表明MEF2是GLUT4蛋白转录过程的必需因子,运动通过提高MEF2/GLUT4 DNA结合活性而提高GLUT4基因和蛋白的表达,但机制尚不清楚。本文旨在通过研究四周耐力训练对AMPKα2高表达转基因和AMPKα2基因敲除鼠,骨骼肌总MEF2含量,核内MEF2含量,MEF2/GLUT4 DNA结合活性以及GLUT4表达的影响,探讨运动提高骨骼肌MEF2/GLUT4 DNA结合活性及GLUT4基因和蛋白的表达可能机制。方法:C57BL/6J野生小鼠、AMPK a 2高表达转基因和AMPK a 2基因敲除鼠各20只,按体重各随机分为2组:安静对照组,耐力训练组,共6组,每组10只。耐力训练组小鼠训练设计为0坡度跑台运动,跑台速度为12m/min,每天训练一个小时,每周六天,持续四周。训练组小鼠最后一次训练后12小时取材。Western blot法测定AMPK (THr72)磷酸化水平、总MEF2、核内MEF2、GLUT4蛋白含量。CHIP法测定MEF2/GLUT4 DNA结合活性。Real-Time PCR法测定GLUT4mRNA含量。结果:野生鼠四周耐力训练后,GLUT4基因表达量显著增加的同时伴随着MEF2/GLUT4 DNA结合活性的显著增加,为运动通过提高MEF2 DNA结合活性而提高GLUT4表达提供了进一步的证据。AMPKα2高表达转基因鼠四周耐力训练后,AMPKα(THr172)磷酸化水平,核内MEF2蛋白表达,MEF2/GLUT4 DNA结合活性,GLUT4基因和蛋白表达量均显著高于野生鼠,提示了“运动-AMPK激活-核内MEF2表达增多-MEF2-GLUT4DNA结合活性增加-GLUT4基因和蛋白表达增多”这样一条通路的存在。虽然四周耐力训练后AMPKα2基因敲除小鼠AMPKα(THr172)磷酸化水平及核内MEF2含量均显著低于野生鼠,但MEF2/GLUT4 DNA结合活性以及GLUT4基因和蛋白含量与野生鼠相比无显著差异,提示了在AMPK a 2基因缺失情况下,运动还可以募集其他的信号通路代偿AMPK a 2对MEF2/GLUT4 DNA结合活性以及GLUT4基因和蛋白含量的调节作用。

全文目录


摘要  5-6
ABSTRACT  6-9
1 前言  9-10
2 文献综述  10-25
  2.1 GLUT4概述  10-13
    2.1.1 GLUT4的组织分布  10
    2.1.2 GLUT4的结构特征  10-12
    2.1.3 运动与GLUT4  12-13
  2.2 MEF2的概述  13-17
    2.2.1 MEF2结构特征  13-15
    2.2.2 MEF2生物学作用  15-16
    2.2.3 运动与MEF2/GLUT4 DNA结合活性  16-17
  2.3 AMPK概述  17-21
    2.3.1 AMPK的结构及表达  17-18
    2.3.2 AMPK的活性调节  18-19
    2.3.3 AMPK激酶,激活剂和抑制剂的研究  19-20
    2.3.4 运动与AMPK  20-21
  2.4 AMPK对GLUT4转位调节作用  21-22
  2.5 AMPK对MEF2/GLUT4 DNA结合活性及GLUT4基因蛋白表达的调节作用  22-25
3 研究方法  25-30
  3.1 研究对象  25-26
  3.2 运动方案和取材  26
  3.3 仪器、试剂与指标测定方法  26-29
    3.3.1 mRNA表达  26-27
    3.3.2 蛋白表达  27-28
    3.3.3 MEF2/GLUT4 DNA结合活性  28-29
  3.4 数据统计  29-30
4 研究结果  30-34
  4.1 耐力训练对小鼠骨骼肌AMPKα(THR172)磷酸化水平的影响  30
  4.2 耐力训练对小鼠骨骼肌细胞总MEF2和核内MEF2蛋白表达量的影响  30-32
  4.3 耐力训练对小鼠骨骼肌细胞核内MEF2与GLUT4 DNA结合活性的影响  32
  4.4 耐力训练对小鼠Glut4基因和蛋白表达量的影响  32-34
5 分析与讨论  34-39
  5.1 耐力训练对AMPK三种不同基因状态鼠骨骼肌AMPK α(THR172)磷酸化水平的影响  34
  5.2 耐力训练对AMPK三种不同基因状态鼠骨骼肌MEF2/GLUT4 DNA结合活性的影响  34-37
  5.3 耐力训练对AMPK三种不同基因状态鼠骨骼肌细胞总MEF2及核内MEF #2蛋白表达的影响  37-39
6 结论  39-40
致谢  40-41
参考文献  41-48
附录  48-49
个人简历 在读期间发表的学术论文与研究成果  49

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中图分类: > 文化、科学、教育、体育 > 体育 > 体育理论 > 体育基础科学 > 运动生物化学
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