学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

新型酪氨酸酶抑制剂UP302临床前药代动力学研究

作　者: 朱凌
导　师: 李佐刚；张双庆
学　校: 中国药品生物制品检定所
专　业: 药物分析学
关键词: UP302 大豆苷元 超高效液相-串联质谱 药代动力学
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 86次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


UP302化学名称为1-（2,4-二羟苯基）-3-（2,4-二甲氧基-3-甲苯）丙烷,是从桔梗兰中提取出来的新型天然植物活性物质,是一种新型酪氨酸酶抑制剂。由于酪氨酸酶的活性与色素障碍性皮肤病、食品褐变等均有密切关系,新型酪氨酸酶抑制剂UP302对色素障碍性皮肤病的治疗、食品保鲜及农业抗虫领域均具有重要意义。目前,研究人员正将UP302开发成一种治疗色素障碍性皮肤病的新型药物,因此对其开展揭示其ADME（吸收、分布、代谢和排泄）速度和状况的临床前药代动力学（Phamacokinetics, PK）和毒代动力学（Toxicokinetics, TK）的研究是十分必要的。本研究课题建立了测定大鼠血浆、皮肤、尿液、粪便以及微粒体体系中UP302的超高效液相-串联质谱的方法,都进行了相应的方法学验证,并成功将其应用于UP302大鼠临床前药代动力学研究。第一,采用甲醇提取生物样品中UP302,以大豆苷元为内标,在Hypersil Gold C18色谱柱上以流动相甲醇-5 mmol·L-1甲酸铵水溶液梯度洗脱,流速0.2 mL·min-1,柱温30°C;在电喷雾离子化电离源上以选择反应监测方式进行负离子检测,用于定量分析的离子反应分别为301.1→135.2（UP302）和m/z 252.9→132.0（大豆苷元）。本方法的特异性、灵敏度、检测范围、重现性、准确度和精密度均满足药代动力学的研究要求。第二,研究了大鼠尾静脉注射5 mg·kg-1 UP302在体内的吸收情况。大鼠尾静脉注射5 mg·kg-1 UP302,采集给药后2,5,15,30,45 min,1,2,3,4,6 h血样,利用LC-MS/MS测定UP302的含量,采用WinNonLin 5.2.1软件的非房室模型分析计算UP302静注血浆药代动力学参数。结果表明,UP302在大鼠体内半衰期短,体内分布较广,体内固有清除率大。第三,研究了UP302乳膏透皮给药后,在大鼠体内的吸收排泄情况。两组剃除背部脊柱两侧毛发的大鼠在脱毛处皮肤涂上UP302乳膏10 mg·cm-2（以UP302计为0.2 mg·cm-2 ）,给药面积为3 cm×4 cm。一组大鼠在给药前和给药后1,2,4,6,8,12,16,20和24 h采集血样,并在给药后24 h取给药部位皮肤,另一组大鼠用于收集24 h粪便和尿液。测定大鼠给药部位皮肤、粪便和尿液中UP302含量。血浆、皮肤和粪便中的UP302透皮分布分数分别为8.07%、0.087%和0.091%,24 h尿中未发现UP302。皮肤上残留的UP302乳膏量为78.96%。第四,通过体内药动学结果显示,UP302消除半衰期很短,有很可能是肝药酶快速代谢快所致,因此继续开展了UP302在体外肝微粒体孵育体系中的稳定性的研究。首先建立了大鼠肝微粒体体系的超高相液相色谱-串联质谱检测方法并进行了方法学验证,其次对大鼠肝微粒体体外孵育体系的孵育时间、底物浓度、酶浓度等条件进行了摸索和优化。其次在已优化好的孵育时间、底物浓度、酶浓度等条件的基础上,研究UP302体外代谢情况。确定了酶动力学参数,最大反应速度Vmax为196.08μmol·L-1·min-1·g-1 ,米氏常数Km为14.98μmol·L-1,内在代谢清除率CLint为13.09 mL-1·min-1·g-1。第五,研究了UP302体外稳定性情况。UP302孵育在大鼠、狗、猴和人血浆中,测定不同时间血浆中剩余UP302百分含量,结果显示,UP302含量百分比在四种生物血浆中均存在明显下降,前4 h下降较快,游离UP302剩余量均在40%以下。4 h后游离UP302浓度趋于稳定。对照组pH 7.4磷酸盐缓冲液中UP302含量百分比无明显变化。

全文目录


缩略语表  6-8
摘要  8-10
ABSTRACT  10-12
前言  12-16
第一部分 高效液相色谱测定新型酪氨酸酶抑制剂UP302 方法的建立及验证  16-26
  引言  16
  1. 仪器与试药  16-17
  2. 色谱条件  17
  3. 溶液配制  17-19
    3.1 UP302 标准贮备液的配制  17
    3.2 UP302 质控（QC）溶液的配制  17-18
    3.3 UP302 线性标准溶液的配制  18
    3.4 UP302 系统适用性溶液配制  18
    3.5 流动相和洗针液的配制  18-19
  4. 方法学专属性  19-20
  5. 系统适应与系统漂移  20-21
  6. 线性关系考察  21-22
  7. 精密度与准确度  22
  8. 耐用性  22-24
  讨论  24-25
  小结  25-26
第二部分 超高效液相色谱－串联质谱联用测定大鼠血浆和皮肤中新型酪氨酸酶抑制剂UP302 方法的建立及验证  26-46
  引言  26
  1. 仪器与试药  26-27
  2. 色谱与质谱条件  27-28
  3. 溶液配制  28-31
    3.1 UP302 储备液和内标大豆苷元储备液的配制  28
    3.2 内标溶液的配制  28
    3.3 UP302 工作液的浓度及配制  28-29
    3.4 UP302 血浆标准样品、血浆质控（QC）样品及血浆样品最低检测限(LLOD)的浓度及配制  29-31
    3.5 UP302 皮肤标准样品、皮肤质控（QC）样品的浓度及配制  31
  4. 血浆样品预处理  31-32
  5. 皮肤样品处理  32
  6. 方法学专属性  32-36
  7. 基质效应和回收率  36-37
  8. 精密度和准确度  37-38
  9. 线性关系考察  38-39
  10. 稳定性实验  39-40
    10.1 样品短期室温放置稳定性  39
    10.2 样品处理后的室温放置稳定性  39
    10.3 样品长期冷冻稳定性  39-40
  11. 皮肤样品的方法学部分验证  40-43
    11.1 方法学专属性  40-42
    11.2 线性考察及定量下限  42
    11.3 精密度与准确度  42-43
  讨论  43-45
  小结  45-46
第三部 UP302 在大鼠体内药代动力学研究  46-61
  引言  46
  1. 实验材料  46-47
    1.1 实验药物  46
    1.2 内标化合物  46-47
    1.3 试剂  47
    1.4 实验动物  47
  2. 实验管理  47
  3. 实验方法  47-48
    3.1 UP302 乳膏大鼠皮肤药代动力学  47-48
    3.2 UP302 原料大鼠静注药代动力学  48
  4.U P302 乳膏的高效液相色谱测定方法  48-50
    4.1 仪器  48-49
    4.2 色谱条件  49
    4.3 皮肤上UP302 乳膏残留量的测定  49-50
  5. 数据处理与分析  50
  6. 实验结果  50-57
    6.1 UP302 乳膏大鼠皮肤药代动力学  50-53
    6.2 UP302 原料大鼠静注药代动力学  53-54
    6.3 UP302 乳膏皮肤残留量  54-57
  讨论  57-60
  小结  60-61
第四部分 UP302 在体外肝微粒体孵育体系中方法学验证以及体外代谢稳定性研究  61-79
  引言  61-62
  1. 实验材料  62-63
    1.1 实验药品与试剂  62
    1.2 肝微粒体体系  62-63
    1.3 主要仪器  63
  2. 溶液配制  63-64
    2.1 UP302 标准储备液的配制  63
    2.2 内标大豆苷元标准储备液的配制  63
    2.3 流动相的配制  63
    2.4 UP302 和大豆苷元工作液的配制  63-64
  3. 温孵条件  64-65
  4. 样品处理  65
  5. 色谱、质谱条件  65-66
  6. 孵育时间对UP302 体外代谢的影响  66
  7. 底物浓度对UP302 体外代谢的影响  66-67
  8. 肝微粒体蛋白浓度对UP302 体外代谢的影响  67
  9. 酶促反应动力学参数的测定  67
  10. 实验结果  67-76
    10.1 方法学验证  67-72
    10.2 体外代谢影响因素实验  72-76
  讨论  76-78
  小结  78-79
第五部分 UP302 体外稳定性研究  79-88
  引言  79
  1. 实验材料  79
  2. 溶液配制  79-80
  3. 实验方法  80-82
    3.1 血浆稳定性  80
    3.2 缓冲液稳定性  80-81
    3.3 皮肤匀浆稳定性  81
    3.4 对照组  81-82
  4. 实验结果  82-86
    4.1 血浆稳定性结果  82-83
    4.2 缓冲液稳定性结果  83-84
    4.3 皮肤稳定性结果  84-85
    4.4 对照组（纯水体系）稳定性结果  85-86
  讨论  86-87
  小结  87-88
参考文献  88-90
硕士期间撰写的学术论文  90-91
综述  91-99
  参考文献  97-99
致谢  99-100

相似论文

  1. 吲达帕胺微孔渗透泵片的制备及质量研究,TQ463
  2. 植物异黄酮对去卵巢大鼠骨代谢影响的相关研究,R580
  3. 明胶海绵微粒化疗栓塞兔VX2肝移植瘤的药代动力学研究,R735.7
  4. 贝伐单抗-PLGA缓释微球兔眼玻璃体腔注射的药代动力学及药物分布研究,R96
  5. 应用IP-RP-HPLC法研究磷酸肌酸在小鼠体内的药代动力学及代谢处置,R96
  6. 血浆中决奈达隆和活性代谢产物SR35021的定量分析方法研究及其应用,R96
  7. HPLC-MS/MS技术在环苯扎林和来托司坦临床药代动力学研究中的应用,R96
  8. 酪蛋白固体自乳化给药系统的研制及提高口服生物利用度的研究,R96
  9. 莲心生物碱的荧光法含量测定及甲基莲心碱对胺碘酮药代动力学的影响,R965
  10. 抗肿瘤药物CG007的体内药物分析方法建立及药代动力学研究,R96
  11. 比卡鲁胺对映异构体的手性拆分与药物动力学研究,R96
  12. 小鼠血浆和脑组织中肼屈嗪的含量分析方法和肼屈嗪在小鼠体内的药代动力学研究,R965
  13. 黄连、枳实药对的配伍研究,R289.1
  14. 禽病康在免疫抑制雏鸡体内的药代动力学研究,S858.31
  15. 麻保沙星和氟苯尼考在日本对虾体内的药代动力学研究,R96
  16. 氯胺酮对家兔体内信非韦伦的药代动力学的影响,R96
  17. 甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎的药代动力学与临床疗效相关性研究,R96
  18. 消旋卡多曲代谢物（Tiorphan）血药浓度测定及应用,R96
  19. 克拉霉素亚微乳注射液的研究,R94
  20. 家兔烧伤早期痂下水肿液中白蛋白的吸收现象及药代动力学观察,R644
  21. 肾移植病人术中舒芬太尼临床药代动力学,R614

中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
© 2012 www.xueweilunwen.com