磷酸肌酸（PCr）及其代谢产物肌酸（Cr）以及相关ATP的浓度,为外源性PCr药代动力学和代谢处置研究提供生物分析方法学。（2）研究PCr静注给药后的代谢处置和代谢物动力学。（3）研究" />

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应用IP-RP-HPLC法研究磷酸肌酸在小鼠体内的药代动力学及代谢处置

作　者: 徐蕾
导　师: 孙慧君
学　校: 大连医科大学
专　业: 药理学
关键词: 药代动力学高效液相色谱磷酸肌酸肌酸 ATP
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:（1）建立一种离子对反相高效液相色谱法（IP-RP-HPLC）同时测定小鼠血浆和心肌中肌酸的学位论文">磷酸肌酸（PCr）及其代谢产物肌酸（Cr）以及相关ATP的浓度,为外源性PCr药代动力学和代谢处置研究提供生物分析方法学。（2）研究PCr静注给药后的代谢处置和代谢物动力学。（3）研究Cr静注给药后的代谢处置和代谢物动力学。方法:IP-RPHPLC色谱测定条件:固定相为Kromasil-C18色谱柱（4.6×250 mm,5μm）,流动相由0.2% KH₂PO₄+0.08%四丁基硫酸氢铵混合溶液（PH 3.0）（A）、0.2% KH₂PO₄+0.08%四丁基硫酸氢铵混合溶液以1 N NaOH调PH 7.5（B）,以及甲醇（C）组成。梯度洗脱:0～8min（100%A,1 mL/min）→8～10min（85%B+15%C,1.2 mL/min）→10～18min（85%B+15%C,1.2mL/min）→18～20min（80%B+20%C,1.3 mL/min）→20～29min（80%B+20%C,1.3 mL/min）→29～30min（100%A,1 mL/min）。测定波长为210 nm（PCr、Cr）、260 nm（ATP、TMP）。血浆以及心肌样品的预处理采用6%高氯酸沉淀蛋白,离心后的上清液立即以K2CO3中和至中性。以上操作均在冰浴低温下进行,以防PCr降解。选用甲氧苄啶（TMP）为内标,以峰面积比内标法定量,以基线扣除法计算外源性PCr、Cr和相关ATP。药代动力学研究中,小鼠静注给药后不同时间采血分离血浆,经预处理净化后采用IP- RP-HPLC法分析;代谢处置研究中,小鼠静注给药后不同时间取心脏并匀浆,经预处理净化后采用IP-RP-HPLC法分析。测定上述样品中PCr、Cr和ATP浓度。计算有关药代动力学参数和转化分数等。结果:在上述色谱条件下,血浆及心肌中PCr、Cr、ATP及TMP均达基线分离,且不受空白基质的干扰, PCr、Cr、ATP及TMP的tr值分别为6.2、2.9、28.8和17.3min,PCr在1～7500μg/mL（血浆）、7.5～750μg/mL（心肌）,Cr和ATP在1～1500μg/mL（血浆）、7.5～750μg/mL（心肌）范围内线性关系良好（r2>0.99）;三种分析物质控（QC）样品的日内和日间精密度（RSD）分别为≤7.42%和≤8.45%（血浆）以及≤9.07%和≤9.20%（心肌）。准确度在95.96～101.89%（血浆）和94.27～102.99%（心肌）;在血浆和心肌的回收率均>90%。方法学验证表明该法特异性强,精密度和准确度高,符合国家药监局要求。静注PCr 1000 mg/kg后,血浆中的PCr消除符合二室模型一级动力学,消除半衰期t1/2β为22.95～25.35 min;表观分布容积Vd为0.96～0.98 L/kg;清除率CL为0.028 L/（kg·min）;静注PCr后血浆中迅即测出其降解产物Cr,消除类似血管外给药一室模型、一级动力学,其达峰时间tmax为5min;消除半衰期t1/2k（m）为51.6～53.8min,较原药PCr的消除半衰期长;由分别静注原药PCr和合成代谢物后Cr所得Cr的AUC计算得Cr的生成分数f（m）为72..21%。小鼠静注PCr 1000 mg/kg后心肌中未测出PCr,但测出Cr和ATP,Cr的t1/2k（m）为347.12～357.62min;达峰值时间tmax为60min;ATP的t1/2k（m）为685.46～700.54min;达峰值时间tmax为90min。小鼠静注合成代谢物Cr 456mg/kg（与PCr1000mg/kg为等克分子）后,血浆中未测出高于本研究最低检测水平的ATP,且PCr的浓度较空白血浆中内源性PCr的浓度未有增加。血浆中的Cr消除符合二室模型一级动力学,其消除半衰期、MRT均与给予PCr后生成的代谢物Cr的消除半衰期和MRT基本一致。小鼠静注合成代谢物Cr 456mg/kg（与PCr1000mg/kg为等克分子）后心肌中未测出高于本研究最低检测水平的PCr,心肌中Cr和ATP的浓度均增加,且Cr及ATP的消除半衰期、MRT均与给予PCr后生成的代谢物Cr及ATP的消除半衰期和MRT基本一致。小鼠腹腔注射垂体后叶素30U/kg 5分钟后再静脉给药PCr 1000mg/kg,血浆中的PCr消除符合二室模型一级动力学,消除半衰期t1/2β为35.22～38.12 min;表观分布容积Vd为0.95～0.97 L/kg;清除率CL为0.018 L/（kg·min）;血浆中未测出ATP,但可迅速测出其降解产物Cr,消除类似血管外给药一室模型、一级动力学,其达峰时间tmax为10min;消除半衰期t1/2k（m）为78.9⁸5.7min,较原药PCr的消除半衰期长。小鼠腹腔注射垂体后叶素30U/kg 5分钟后再静脉给药PCr 1000mg/kg,心肌中未测出PCr,但测出Cr和ATP, Cr的t1/2为293.19²97.47min;达峰值时间tmax为30min;ATP的t1/2为501.92⁵11.86min;达峰值时间tmax为90min。结论:本研究建立的IP-RP-HPLC法能特异地测定小鼠血浆及心肌中PCr、Cr和ATP。小鼠静注PCr的血浆动力学行为符合二室模型,其消除快速（t1/2β<0.5h）,迅即转化为代谢产物Cr,转化率达给药量的3/5～3/4。生成的Cr的消除较PCr慢,其处置属于消除速率限速型（ERL）,即生成代谢物Cr的消除以其自身固有的速率常数进行消除,而不依赖于原形药PCr。静注PCr后小鼠心肌中Cr和ATP水平明显提高,Cr和ATP在心肌中的半衰期较长。小鼠静注PCr及Cr后心肌中ATP的AUC之比为40.01%。因此我们推测小鼠心肌中的ATP水平升高主要通过两条途径:其一,小鼠静脉给予外源性PCr生成代谢产物Cr,心肌中代谢产物Cr水平的提高使得相关产物ATP水平提高;其二,静脉给予的PCr自身做为高耗能细胞内ATP浓度恒定的“缓冲剂”,可以转变成ADP磷酰基团从而使ATP水平升高。小鼠静注等克分子合成代谢物Cr后,血浆中未测出高于本研究最低检测水平的ATP,且PCr的浓度较空白血浆中内源性PCr的浓度未有增加,血浆中的Cr消除符合二室模型一级动力学,其消除半衰期、MRT均与给予PCr后生成的代谢物Cr的消除半衰期和MRT基本一致;心肌中未测出高于本研究最低检测水平的PCr,心肌中Cr和ATP的浓度均增加,且Cr及ATP的消除半衰期、MRT均与给予PCr后生成的代谢物Cr及ATP的消除半衰期和MRT基本一致。小鼠腹腔注射垂体后叶素5分钟后再静脉给药PCr,血浆中的PCr消除符合二室模型一级动力学,血浆中未测出ATP,但可迅速测出其降解产物Cr,消除类似血管外给药一室模型、一级动力学,其消除半衰期较原药PCr的消除半衰期长;心肌中未测出PCr,但测出Cr和ATP。

全文目录

一、摘要  6-12
  （一）中文摘要  6-9
  （二）英文摘要  9-12
二、正文  12-51
  （一）前言  12-13
  （二）材料与方法  13-18
  （三）结果  18-42
  （四）讨论  42-47
  （五）结论  47-48
  （六）参考文献  48-51
三、文献综述  51-58
  （一）正文  51-56
  （二）参考文献  56-58
四、致谢  58

应用IP-RP-HPLC法研究磷酸肌酸在小鼠体内的药代动力学及代谢处置

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