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补肾化瘀方对PCO大鼠卵巢颗粒细胞上ER和AR基因表达的影响

作　者: 余曦明
导　师: 杨正望
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中西结合妇产科学
关键词: 补肾化瘀方 多囊卵巢综合征 颗粒细胞 雌激素受体 雄激素受体
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：构建PCO大鼠模型,通过观察补肾化瘀方对PCO大鼠卵巢颗粒细胞上ER和AR基因表达的影响,探讨补肾化瘀方治疗多囊卵巢综合征的作用机理及意义。方法：选用6周龄SPF级有规律动情周期的SD雌性大鼠79只,按1：5随机分为正常组和造模组：正常组用1%羧甲基纤维素水溶液灌胃共21天；造模组用配制的来曲唑-羧甲基纤维素溶液灌胃诱导大鼠多囊卵巢病理模型。造模成功后,将造模组随机分为：①模型空白对照组(12只),用生理盐水灌胃,(Qd×3d,休息1d)×21次；②补肾化瘀方高剂量组(13只),用补肾化瘀方高剂量灌胃,(Qd×3d,休息1d)×21次：③补肾化瘀方中剂量组(13只),补肾化瘀方中剂量灌胃,(Qd×3d,休息1d)×21次；④补肾化瘀方低剂量组(13只),补肾化瘀方低剂量灌胃,(Qd×3d,休息1d)×21次；⑤阳性药物对照组(13只),达因-35溶液灌胃,(Qd×3d,休息1d)×21次。干预周期结束后,每组随机抽取八只大鼠的一侧卵巢分离颗粒细胞,实时荧光定量PCR测定基因表达数值以观察补肾化瘀方对PCO大鼠卵巢颗粒细胞上ER和AR表达的影响。结果：①PCO大鼠模型评价：大鼠动情周期失去规律性变化,一直处于动情间期,提示无排卵；光镜下模型组大鼠卵巢形成多囊样改变；,模型组大鼠血清LH、T水平明显高于正常组(P<0.01),E2水平明显低于正常组(P<0.05)。②PCO大鼠卵巢颗粒细胞ER、AR基因的表达：造模组ER、AR基因水平明显低于正常组(P≦0.01)；应用补肾化瘀方干预后,高、低剂量组ER、AR明显高于模型空白对照组(P<0.05)。结论：①应用来曲唑所制备的PCO大鼠模型,是一种理想的PCOS模型,可靠性较强。②补肾化瘀方可以上调PCO大鼠卵巢颗粒细胞上ER和AR基因的表达水平。

全文目录


中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
中英文缩略词表  11-12
引言  12-14
第一部分 实验材料与方法  14-29
  1 实验材料  14-17
    1.1 实验动物  14
    1.2 实验主要药品及试剂  14-16
    1.3 实验设备  16-17
    1.4 实验耗材  17
  2 造模方法  17-18
    2.1 分组  17
    2.2 具体方法  17-18
    2.3 造模评价  18
  3 补肾化瘀方干预实验  18-20
    3.1 动物分组  18
    3.2 药物干预  18-20
    3.3 卵巢组织的采集  20
    3.4 卵巢组织学检查  20
    3.5 血清学检测  20
  4 颗粒细胞ER、AR检测方法  20-28
    4.1 样品的RNA抽提  21-22
    4.2 RNA质量检测  22-24
    4.3 使用样品RNA进行cDNA合成  24-25
    4.4 合成的cDNA用于实时定量PCR  25-28
    4.5 实时定量PCR使用引物列表  28
  5 统计学方法  28-29
第二部分 结果与分析  29-34
  1 PCO大鼠模型的评价  29-31
    1.1 大鼠动情周期变化  29
    1.2 大鼠卵巢形态学观察  29-30
    1.3 血清性激素水平检测  30-31
  2 各组PCO大鼠卵巢颗粒细胞ER的表达  31-32
  3 各组PCO大鼠卵巢颗粒细胞AR的表达  32-33
  4 ER、AR标准曲线图  33
  5 RNA电泳图  33-34
第三部分 讨论  34-45
  1 来曲唑诱导PCO大鼠模型的探讨  34-35
    1.1 PCOS模型建立的现状  34
    1.2 来曲唑诱导PCOS模型的理论基础  34-35
    1.3 本研究应用来曲唑所诱导的PCO大鼠模型的评价  35
  2 现代医学对PCOS的研究  35-41
    2.1 ER与PCOS的关系  35-38
    2.2 AR与PCOS的关系  38-40
    2.3 阳性对照药物的选择  40-41
  3 中医对PCOS的论述  41-44
    3.1 PCOS肾虚血瘀证的中医病理基础  41-42
    3.2 组方的理论依据  42-44
    3.3 采用补肾化瘀方的优势  44
  4 展望  44-45
结论  45-46
致谢  46-47
参考文献  47-50
附录A:附表  50-52
附录B:附图  52-55
附录C:综述  55-65
  参考文献  62-65
附录D:攻读学位期间主要的科研成果和发表论文  65

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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