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雌激素对人胚髁突软骨细胞增殖与分化的影响
作 者: 庞磊
导 师: 张跃蓉
学 校: 遵义医学院
专 业: 口腔基础医学
关键词: 髁突软骨 软骨细胞 雌激素 受体 人胚
分类号: R782.6
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
目的:①初步查明雌激素受体、Ⅱ型胶原在人胚髁突软骨中的分布情况;②探求最佳的人胚髁突软骨细胞体外分离培养方法,以期获得高活性的软骨细胞为后续实验提供载体工具。③观察雌激素对髁突软骨细胞增殖与分化的影响。方法:①采用HE染色、免疫组织化学染色法检测雌激素受体α、β及Ⅱ型胶原在人胚髁突软骨各层的表达情况。②采用机械分离及改良两步酶消化法体外培养髁突软骨细胞,甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色法鉴定软骨细胞,并观察其形态学结构,描绘生长曲线,以建立人胚髁突软骨细胞体外培养体系,为实验提供应用细胞。③MTT法检测不同浓度雌激素(10-6mol/L、10-8mol/L、10-10mol/L、10-12mol/L、0mol/L)对体外分离培养的人胚髁突软骨细胞增殖与分化的影响。结果:①雌激素受体ERα、ERβ在人胚颞下颌关节髁突软骨的纤维层及增殖层几乎未见表达;ERα主要表达于髁突软骨的过渡层、肥大层,钙化软骨层中有少量表达;ERβ集中表达于肥大层,钙化软骨层中表达较少;ERα、ERβ在细胞质、细胞核内均有表达,ERα在细胞内分布均匀,而ERβ集中表达于细胞核内。②Ⅱ型胶原主要表达于髁突软骨的过渡层及肥大层,而纤维层、增殖层未见表达,钙化软骨层中有少量表达。③软骨细胞体外培养早期(1~3代)以三角形、多角形为主,细胞核呈圆形、椭圆形,可见1~2个核仁,大小均一;细胞呈铺路石样生长;培养至第4代后梭形细胞增多,伪足较长,开始呈漩涡状生长。甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色阳性,证明培养的细胞为软骨细胞。④高浓度(10-6mol/L)、低浓度(10-12mol/L)雌二醇抑制软骨细胞增殖,生理浓度(10-10mol/L~10-8mol/L)雌二醇促进软骨细胞增殖,且随着作用时间的延长,促进或抑制作用增强。结论:①ERα、ERβ以及Ⅱ型胶原在人胚髁突软骨呈差异性表达。②机械分离及两步酶消化法可获取均一、高增殖活性的髁突软骨细胞。③雌激素对髁突软骨细胞增殖分化具有双向调节作用,并呈时间和剂量依赖性。
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全文目录
英文缩略词表 7-9 中文摘要 9-10 Abstract 10-12 前言 12-14 第一部分 人胚髁突软骨雌激素受体表达的初步研究 14-22 1 实验目的 14 2 实验材料 14-15 3 实验方法和步骤 15-16 3.1 切片制作 15 3.2 人胚髁突软骨HE染色 15 3.3 人胚髁突软骨ER免疫组织化学染色 15-16 3.4 人胚髁突软骨Ⅱ型胶原免疫组织化学染色 16 4 实验结果 16-20 4.1 人胚髁突软骨解剖形态观察 16-17 4.2 人胚髁突软骨HE染色观察 17-18 4.3 人胚髁突软骨ERα、ERβ免疫组织化学染色观察 18-19 4.4 人胚髁突软骨Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察 19-20 5 讨论 20-21 6 小结 21-22 第二部分 人胚髁突软骨细胞的分离与培养 22-33 1 实验目的 22 2 实验材料 22-24 3 实验方法和步骤 24-26 3.1 人胚髁突软骨细胞的分离与原代培养 24 3.2 人胚髁突软骨细胞的纯化 24 3.3 人胚髁突软骨细胞的传代培养 24-25 3.4 人胚髁突软骨细胞爬片的制备 25 3.5 人胚髁突软骨细胞的形态学观察 25 3.6 绘制生长曲线 25 3.7 人胚髁突软骨细胞鉴定 25-26 4 实验结果 26-30 4.1 人胚髁突软骨细胞的形态学观察 26-28 4.2 第二代人胚髁突软骨细胞生长曲线分析 28-29 4.3 人胚髁突软骨细胞鉴定结果 29-30 5 讨论 30-32 6 小结 32-33 第三部分 雌激素对人胚髁突软骨细胞增殖与分化的影响 33-39 1 实验目的 33 2 实验材料 33-35 3 实验方法和步骤 35-36 3.1 软骨细胞准备 35 3.2 实验分组 35 3.3 呈色 35 3.4 比色 35-36 3.5 统计学分析 36 4 实验结果 36-37 5 讨论 37-38 6 小结 38-39 全文总结 39-44 综述 44-52 参考文献 48-52 致谢 52-53 作者简介 53
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中图分类: > 医药、卫生 > 口腔科学 > 口腔颌面部外科学 > 颞下颌关节疾病
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