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12-脂氧化酶对糖尿病肾病大鼠肾小球内ACE和血管紧张素Ⅱ表达水平的影响

作　者: 高青松
导　师: 许钟镐
学　校: 吉林大学
专　业: 临床医学
关键词: 12-脂氧化酶血管紧张素Ⅱ 血管紧张素转换酶 12(S)-HETE
分类号: R587.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:肾素-血管紧张素系统(Renin-angiotensin system,RAS)的激活在糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)的发生、发展过程中起着重要的作用。12-脂氧化酶(12-lipoxygenase,12-LO)能否通过增加血管紧张素转换酶( Angiotensin-converting enzyme , ACE )表达使血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)的生成增加而发挥其病理生理作用,目前不甚清楚。本实验主要探讨在DN时12-LO对大鼠肾小球内ACE表达和AngⅡ生成水平的影响。方法:体重为200-220g的健康雄性Wistar大鼠16只,在动物室内适应性喂养1周后随即分成正常对照组(Ctrl组, N=8)和12(S)-HETE泵注射组(12(S)-HETE组,N=8;1μg/h)。Ctrl组和12(S)-HETE组大鼠均在无菌条件下用手术方法植入微型渗透泵1枚,其操作过程如下:用乙醚轻度麻醉大鼠,大鼠俯卧在无菌动物手术台上,在背部切开1cm的横向切口,用止血钳纵向钝性分离皮下组织,之后纵向植入微型渗透泵1枚,最后缝合切口。采用微型渗透泵给Ctrl组和12(S)-HETE组大鼠分别持续恒速注射溶剂和12(S)-HETE1周。体重为200-220g的健康雄性Wistar大鼠30只,适应性喂养1周后随机选取20只大鼠,给予一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65mg/kg,枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液溶解),正常大鼠组亦腹腔注射相同体积的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液。大鼠腹腔注射STZ 48h后测血糖,血糖>17.6mmol/L的大鼠纳入模型组,将模型组分为糖尿病肾病组(DN组;N=10)和CDC组(4mg/kg,2次/周,皮下注射) (CDC组;N=10)。余下10只为正常对照组(N组;N=10)。实验进行6周,最后留取大鼠24小时尿,称体重、测血糖。采用乙醚麻醉大鼠,通过心脏直接取血,取出右肾称重,采用筛网法分离肾小球,血清和肾小球标本在-70℃冰箱保管。观察大鼠肾小球内12(S)-HETE、ACE、AngⅡ的变化。采用ELISA、RT-PCR和Western blot分别检测目标基因mRNA和蛋白的表达。结果:泵注射12(S)-HETE使大鼠的血糖、尿白蛋白略升高,与正常对照组大鼠比较,仅有升高趋势。与正常大鼠比较,DN大鼠血糖、肾重/体重比值和24小时尿蛋白定量均明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。CDC能够抑制DN肾小球肥大,与DN病大鼠比较,CDC处理组肾重/体重均降低(P<0.05);血糖及24h尿蛋白有下降的趋势,但无统计学意义,对体重无明显影响。泵注入12(S)-HETE后,与对照组比较,大鼠肾小球内AngⅡ蛋白表达明显增加(P <0.05)。与对照组大鼠比较,DN大鼠肾小球内AngⅡ蛋白表达明显增加,(P<0.01);与DN组比较,CDC处理组大鼠肾小球内AngⅡ蛋白含量明显下降(P<0.05)。DN大鼠肾小球内12(S)-HETE含量增加,CDC能够明显降低12(S)-HETE的含量,与DN组比较,CDC处理组12(S)-HETE含量明显降低(P<0.05)。泵注射12(S)-HETE使大鼠肾小球内ACE mRNA表达明显增多(P<0.05);DN大鼠肾小球内ACE mRNA表达明显增加,CDC能够降低DN大鼠肾小球内ACE mRNA的表达,与DN组大鼠比较,CDC处理组大鼠肾小球内ACE mRNA表达明显降低(P<0.05)。与对照组大鼠比较,泵注射12(S)-HETE使大鼠肾小球内AngⅠ/Ⅱ表达明显增多(P<0.05);CDC未处理DN大鼠肾小球内AngⅠ/Ⅱ表达明显增加,CDC能够减少DN大鼠肾小球内AngⅠ/Ⅱ的表达(P<0.05)。结论;12(S)-HETE使大鼠血糖、24小时尿蛋白略升高,增加肾小球内ACE mRNA和AngⅡ蛋白的表达,但对大鼠体重、肾重/体重无明显影响。DN大鼠肾小球内12(S)-HETE含量增加;ACE mRNA和AngⅡ蛋白表达明显增加。CDC能够减轻DN大鼠肾脏肥大,减少肾小球内ACE mRNA、AngⅡ蛋白的表达。12-LO通过增加ACE和AngⅡ的表达而参与DN的病理过程。创新点:国内外首次证明:1)12-脂氧化酶可以上调肾小球内ACE mRNA表达和AngⅡ蛋白含量;2)抑制12-脂氧化酶活性可以降低糖尿病肾病时肾小球内ACE mRNA表达和AngⅡ蛋白含量,从而延缓糖尿病肾病的进展。

12-脂氧化酶对糖尿病肾病大鼠肾小球内ACE和血管紧张素Ⅱ表达水平的影响

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