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盐酸法舒地尔对人脐静脉内皮细胞骨架作用及机制的研究

作 者: 杨雪佳
导 师: 王高频
学 校: 辽宁医学院
专 业: 内科学
关键词: 动脉粥样硬化 血管紧张素Ⅱ 人脐静脉血管内皮细胞 细胞骨架 Rho激酶
分类号: R96
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


目的观察盐酸法舒地尔对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞骨架Rho激酶(ROCK)和磷酸化肌球蛋白轻链(P-MLC)表达的影响,来探讨盐酸法舒地尔对内皮细胞骨架的作用及可能的分子机制。方法采用胶原酶消化新生儿脐带,原代培养HUVECs,根据镜下细胞的形态学特征及免疫细胞化学法检测细胞内Ⅷ因子相关抗原抗体的表达,以对原代HUVECs进行鉴定。内皮细胞传至3~5代用于实验。分四组:正常对照组;AngⅡ组(AngⅡ终浓度10-7mol/L);ROCK阻断剂组(Y-27632终浓度为30umol/L,AngⅡ终浓度10-7mol/L);盐酸法舒地尔组(盐酸法舒地尔终浓度为50umol/L,AngⅡ终浓度10-7mol/L)。用四噻唑蓝(MTT)法测定盐酸法舒地尔对AngⅡ(10-7mol/L)诱导HUVECs活力的影响;硝酸还原酶法观察盐酸法舒地尔对AngⅡ(10-7mol/L)诱导HUVECs功能的影响;免疫荧光法观察细胞骨架纤维状肌动蛋白(F-actin)形态及分布的变化;Western Bloting法测定内皮细胞ROCK和P-MLC蛋白定量的表达。结果1、内皮细胞鉴定:倒置显微镜观察,融合的HUVECs为扁平、多角形及短梭形,呈典型的铺路石样紧密排列;免疫细胞化学法观察正常HUVECs的胞浆内Ⅷ因子相关抗原抗体阳性,出现大量棕色颗粒积聚、浓染。2、盐酸法舒地尔对AngⅡ诱导HUVECs活力及功能的影响:①MTT法观察HUVECs活力:与正常对照组比较,AngⅡ对HUVECs活力有明显抑制作用(P<0.01);ROCK阻断剂组与盐酸法舒地尔组对细胞活力的抑制作用较AngⅡ组明显减弱(P<0.01)。②硝酸还原酶法检测HUVECs功能:与正常对照组比较,AngⅡ组HUVECs上清液中NO含量显著减少(P<0.01);ROCK阻断剂组与盐酸法舒地尔组NO含量较AngⅡ组显著升高(P<0.01)。3、盐酸法舒地尔对AngⅡ诱导HUVECs细胞骨架的影响:免疫荧光法观察F-actin形态及分布的变化。与正常对照组比较,ROCK阻断剂组与盐酸法舒地尔组都可以使AngⅡ诱导的HUVECs外周致密带变细,融合成单层细胞间的“空洞状”裂隙变小,细胞形态明显好于AngⅡ组。4、盐酸法舒地尔对AngⅡ诱导HUVECs的ROCK及P-MLC蛋白定量表达的影响:①与AngⅡ组比较,ROCK阻断剂组和盐酸法舒地尔组可使ROCK蛋白表达降低(0.538±0.053%,0.529±0.016% vs 1.374±0.015%,P<0.01),但仍高于正常对照组(P<0.01),盐酸法舒地尔组与ROCK阻断剂组比较(P>0.05);②与AngⅡ组比较,ROCK阻断剂组和盐酸法舒地尔组可使P-MLC蛋白表达降低(0.599±0.040%,0.608±0.022% vs 1.339±0.042%,P<0.01),但仍高于对照组(P<0.01),盐酸法舒地尔组与ROCK阻断剂组比较(P>0.05)。结论①AngⅡ对HUVECs活力、功能及细胞骨架有严重的损伤。盐酸法舒地尔可以通过加强内皮细胞活力,增加NO含量,改善内皮细胞骨架F-actin的形态学变化而保护内皮细胞;②盐酸法舒地尔对受损HUVECs的保护作用可以通过抑制Rho/ROCK信号转导通路下游的ROCK及P-MLC的表达,对内皮细胞活力、功能及细胞骨架起到更好的保护作用。

全文目录


中文论著摘要  4-6
英文论著摘要  6-9
英文缩略语表  9-10
前言  10-11
材料与方法  11-17
结果  17-24
讨论  24-27
结论  27-29
本研究创新性的自我评价  29-30
参考文献  30-33
附录  33-53
  文献综述  33-50
    参考文献  44-50
  在学期间科研成绩  50-51
  致谢  51-52
  个人简介  52-53

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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