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目的：通过体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立肾上腺素(Adr)损伤模型,并以肝素(Hep)为阳性对照,探讨螺旋藻激酶(SPK)对HUVEC活力的影响,以及对HUVEC分泌人血管假血友病因子(vWF),组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制剂(PAI-1)的影响,从内皮细胞抗血栓功能方面来探讨螺旋藻激酶对心血管系统的保护作用,为开发新型溶栓药提供理论依据。方法：1.体外培养HUVEC,通过MTT法,检测SPK和Adr对HUVEC活力的影响,确定实验组浓度和损伤模型组Adr的浓度；2.体外培养HUVEC,随机分成7组：空白对照组(10%胎牛血清),Adr损伤模型组(Adr 100μg/ml),肝素对照组(5 mg/L), SPK对照组(SPK 2 mg/ml), SPK低剂量组(SPK 0.5 mg/ml+Adr 100μg/ml), SPK中剂量组(SPK 1 mg/ml+Adr 100μg/ml), SPK高剂量组(SPK 1 mg/ml+Adr 100μg/ml),孵育12h、24h和48h, MTT比色法检测细胞活力变化,收集细胞培养上清液,ELISA法检测HUVEC培养上清液中的vWF, t-PA和PAI-1的含量。结果：1、SPK对HUVEC细胞活力的影响：与空白对照组比较,在一定范围内SPK具有促进HUVEC生长的作用,当SPK浓度≤2 mg/ml,细胞活力呈浓度依赖性升高(P<0.05)。SPK浓度为2 mg/ml时,细胞活力达到最大,之后随着SPK浓度进一步增大,细胞活力下降(P<0.05)。2、Adr对细胞活力的影响：和空白对照组相比,Adr具有抑制HUVEC生长的作用。给药24h,Adr≤50μg/ml,对细胞活力没有明显作用(p>0.05)；100μg/ml,对细胞活力有明显的抑制作用(P<0.05),细胞损伤率达32.92%,故选此浓度为损伤模型组刺激浓度。3、SPK对Adr刺激下HUVEC细胞活力的影响：与空白对照组相比,给药12h,各组细胞活力无明显变化(p>0.05)；给药24h和48h,肝素组、Adr模型组、和SPK各剂量组细胞活力均有明显下降(P<0.05),其中Adr模型组下降最明显。和Adr模型组比较,给药12h, SPK高剂量组的细胞活力明显上升(P<0.05)。给药24h和48h,肝素组、SPK各剂量组的细胞活力均上升显著(P<0.05),且24h时,SPK各剂量组,细胞活力呈剂量依赖性上升。4、SPKK对Adr刺激下HUVEC分泌t-PA的影响：与空白对照组相比,SPK单独作用对HUVEC释放t-PA无影响(p>0.05)；给药12h,24h和48h, Adr模型组,肝素组,SPK各剂量组细胞培养上清液中t-PA的含量均升高,除给药12h,肝素组和SPK低剂量组差异不明显外(p>0.05),其它各组差异均有统计学意义(P<0.05)。与Adr模型组相比,给药24h和48h, SPK各剂量组对HUVEC分泌t-PA呈剂量依赖性降低。5、SPK对Adr刺激下HUVEC分泌PAI-1的影响：与空白对照组相比,SPK单独作用对HUVEC释放PAI-1无影响(p>0.05)；给药24h和48h, Adr模型组PAI-1含量明显升高(p<0.05)。与Adr模型组相比,12h,肝素组PAI-1含量明显降低(p<0.05),SPK各剂量组无明显变化(p>0.05),24h和48h,肝素组,SPK各剂量组均能有效抑制PAI-1分泌(p<0.05)(24h,SPK低剂量组(p>0.05)除外),且SPK各剂量组对HUVEC分泌PAI-1呈剂量依赖性降低。6、SPK对Adr刺激下HUVEC分泌vWF的影响：与空白对照组相比,SPK单独作用对HUVEC分泌vWF无影响(p>0.05);给药12h,各组细胞培养上清液中vWF含量均无明显差异(p>0.05)；给药24h的Adr模型组、SPK低、中剂量组和48h的Adr模型组、肝素组、SPK各剂量组细胞培养上清液中vWF含量明显升高(p<0.05)。与Adr模型组相比,给药12h, SPK高剂量组vWF含量明显下降(p<0.05)；给药24h和48h,肝素组,SPK各剂量组均可以抑制HUVEC释放vWF,除24h, SPK低剂量组外,差异显著(p<0.05)。且24h,SPK各剂量组对vWF分泌呈剂量依赖性抑制关系。结论：SPK不仅可以在单独作用时提高HUVEC细胞活力,而且可以拮抗Adr刺激对HUVEC的损伤。SPK对HUVEC具有一定的保护作用,减少Adr刺激下HUVEC分泌t-PA,vWF和PAI-1的释放,从而提高t-PA/PAI-1比值,稳定了vWF的分泌,使内皮细胞表面纤溶活性增高,增强抗血栓作用。
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