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环氧二十碳三烯酸对内皮细胞内质网应激的作用及机制

作 者: 刘甜甜
导 师: 汪培华;汪道文
学 校: 华中科技大学
专 业: 内科学
关键词: 环氧二十碳三烯酸 2h-11细胞 脐静脉内皮细胞 内质网应激 细胞凋亡
分类号: R363
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


目的:探讨花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物环氧二十碳三烯酸(Epoxyeicosatrienoic acids,EETs)对内皮细胞内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)的作用及机制。方法:1、用10μM衣霉素(TM)诱导2h-11细胞和脐静脉内皮细胞(HUVECs)产生内质网应激,应用Western Blot检测细胞内质网应激相关蛋白p-PERK、Grp78、Xbp-1等水平的表达。2、分别应用50nM,250nM和1μM的三种EETs(8,9-EET、11,12-EET和14,15-EET)处理内皮细胞,应用Western Blot检测内质网应激相关蛋白p-PERK、Grp78、Xbp-1等的表达和内质网促凋亡蛋白CHOP、p-c-Jun和有活性的caspase 12的表达;应用流式细胞仪检测内皮细胞的凋亡情况;应用CCK-8检测内皮细胞的活性。3、用相关信号通路抑制剂(G蛋白、Gs蛋白、腺苷酸环化酶、蛋白激酶A、蛋白激酶G、PI3K、EGFR、MEK和PPAR-γ抑制剂)处理2h-11细胞和HUVECs,应用Western Blot检测内质网应激相关蛋白Grp78的表达。结果:1、Western Blot结果显示,2h-11细胞在TM处理4h时,内质网应激相关蛋白p-PERK、Grp78、Xbp-1等水平明显增加。脐静脉内皮细胞在TM处理8h时,p-PERK、Grp78、Xbp-1等水平明显增加;有显著统计学意义(P<0.05)。2、8,9-EET、11,12-EET和14,15-EET可以明显减少TM诱导的2h-11细胞Grp78水平,且11,12-EET较其它两种EETs,能明显的减少p-PERK的水平。11,12-EET对Xbp-1和p-PERK的表达具有浓度依赖性。而14,15-EET与8,9-EET、11,12-EET和TM+DMSO相比,均能降低Grp78的表达水平,且14,15-EET对Xbp-1的表达具有浓度依赖性。流式细胞术和CCK-8检测结果显示:在2h-11细胞中,TM+DMSO组和TM+11,12-EET组的凋亡百分数分别为:(35.210±2.887)%和(15.690±1.732)%,细胞的凋亡百分数并增加细胞活性(P<0.05);在HUVECs中,TM+DMSO组和TM+14,15-EET组的凋亡百分数分别为:(41.673±3.756)%和(22.970±1.732)%,细胞活性分别为1.131±0.028和1.594±0.094,这表明,14,15-EET能明显降低HUVECs的凋亡百分数并增加细胞活性(P<0.05)。3、G蛋白抑制剂GDP-β-s、Gs蛋白抑制剂NF-449、腺苷酸环化酶(AC)抑制剂SQ22536、蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89和蛋白激酶G(PKG)抑制剂KT-5823与TM+EETs组相比,Grp78水平明显增加(P<0.05)。而EGFR、MEK、PI3K和PPAR-γ抑制剂与TM+EETs组相比,Grp78水平无明显改变,无统计学差异(P>0.05)。结论:1、外源性的EETs可以改善由衣霉素诱导的内皮细胞的内质网应激和细胞凋亡,并增加细胞的活性。2、外源性的EETs改善由衣霉素诱导的内皮细胞的内质网应激的机制可能是通过G蛋白偶联受体,进而激活PKA和PKG。3、外源性的EETs改善由衣霉素诱导的内皮细胞的内质网应激的机制可能不通过激活PI3K、EGFR、MEK和PPAR-γ。

全文目录


中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
研究背景  9-11
实验材料  11-17
实验方法  17-22
实验结果  22-35
讨论  35-37
参考文献  37-41
全文小结  41-42
综述  42-54
  参考文献  48-54
英文缩略词表  54-57
致谢  57-58

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 病理学 > 病理生理学
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