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脂氧素A₄调节人脐静脉内皮细胞通透性的机制初探

作　者: 易攀
导　师: 叶笃筠
学　校: 华中科技大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 脂氧素A4 人脐静脉内皮细胞脂多糖通透性
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 8次
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内容摘要

研究背景:血管内皮作为机体调节心脑血管系统稳态最大的代谢和内分泌器官越来越受到重视,其重要功能之一即是作为血液和组织间物质转运的屏障,一旦血管内皮细胞受损,则必将影响甚至破坏内皮细胞正常的生物学功能,最明显的表现即是血管内皮的通透性增加,它将导致全身系统性的疾病产生,诸如动脉粥样硬化形成,高血压,先兆子痫引起的水肿等疾病。因此,如何保护内皮细胞免受损害,维持正常的内皮通透性显然成为了心脑血管等疾病预防领域的研究热点。由于炎性氧化应激引起内皮细胞通透性增加引起血栓、水肿是心血管疾病、微血管功能障碍的重要致病表现。而脂氧素（Lipoxins,LXs）作为第一个在活体内被鉴定的内源性刹车信号家族成员,具有促进炎症消退的作用,于此同时本实验室组曾报道脂氧素在脂多糖刺激的巨噬细胞中能够发挥抗氧化作用,病理性妊娠及心血管疾病患者的血中脂氧素含量相当低,这提示我们脂氧素很有可能对炎性氧化应激引起内皮细胞通透性增加起到缓解作用以维持正常的内皮功能。目的:探讨脂氧素对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞高通透性的调节及其作用机制。方法:培养人脐静脉内皮细胞株CRL-1730,实验分为三组:空白对照组,脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）刺激组,脂多糖（LPS）+脂氧素A₄（LXA₄）干预组,苏木精-伊红染色法（Hematoxylin&Eosine,HE）观察细胞的形态变化,单层内皮细胞通透性测定方法测定细胞通透性,活性氧试剂盒检测活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）含量,Real-time PCR检测（Formyl-peptide receptor like 2, FPRL2）受体的表达,RT-PCR法分别检测血管内皮钙粘附素（VE-cadherin）、β-catenin、瞬间受体电位通道（Transient receptor potential channel 1,TRPC1）的mRNA水平,免疫印迹法检测VE-cadherin、β-catenin的蛋白含量,荧光免疫细胞化学法观察VE-cadherin的表达,钙成像技术检测细胞内钙浓度的变化。结果:⑴. LXA₄刺激后,CRL-1730的FPRL2受体表达与原代HUVEC细胞受体表达量接近且LXA₄能够上调FPRL2的表达。⑵与对照组相比,LPS刺激组细胞形态变圆且小,细胞与细胞之间间隙变大,LPS+LXA₄组接近正常对照组。⑶与对照组相比,LPS刺激组细胞的通透性明显增加（**P<0.01）.,LPS+LXA₄组能有效的抑制通透性的变化（**P<0.01）,但无LXA₄剂量依赖性,LPS+LXA₄+BOC-2组通透性仍然增加（**P<0.05）,进一步验证人脐静脉内皮细胞株发挥作用很可能由脂氧素受体FPRL2介导。⑷与对照组相比,LPS刺激组VE-cadherin、β-catenin的mRNA及蛋白水平均下调,TRPC1的mRNA水平增加（*P<0.05）,免疫荧光显示VE-cadherin表达减弱,细胞间间隙增大,LPS+LXA₄组VE-cadherin、β-catenin mRNA及蛋白水平相对于LPS刺激组表达均上调（*P<0.05）,TRPC1的mRNA水平较LPS刺激组低（*P<0.05）,VE-cadherin荧光也接近对照组,间隙没有明显增大。⑸LPS刺激组中ROS的产量高于对照组（*P<0.05）,LPS+LXA₄组ROS的产量较LPC刺激组有明显下降（*P<0.05）⑹与对照组相比,LPS刺激组胞内F340/F380荧光比值明显增高（**P<0.01）,LPS+LXA₄组,与LPS刺激组相比,荧光比值下降明显。（**P<0.01）结论:脂氧素具有减轻LPS所致的内皮细胞通透性增加的作用,其机制可能通过抑制内皮细胞胞内活性氧的产生进而阻断Ca²⁺信号,防止VE-cadherin/β-catenin解体,来维持内皮细胞之间的紧密连接。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
前言  11-12
材料与方法  12-27
结果  27-33
讨论  33-36
参考文献  36-39
综述  39-58
  参考文献  51-58
致谢  58

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