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交联葡聚糖磁性微粒细胞毒性及其细胞相互作用研究

作　者: 华恺
导　师: 崔亚丽
学　校: 西北大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 交联葡聚糖磁性微粒 MTT法 细胞毒性 细胞吞噬
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 32次
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内容摘要


由于磁性纳微米材料本身所具有的独特的物理化学性质,使其在生物医学领域如临床诊断、免疫检测、肿瘤热疗和靶向给药等方面表现出无与伦比的优势。但是磁性纳微米材料在生物医学领域应用中的安全性,是影响其应用的主要因素,也是目前纳微米材料所面临的重要难题,因此磁性纳微米材料的毒性评价和毒理学研究成为了一项必不可少而又迫在眉睫的工作。交联葡聚糖磁性纳微米材料是由本实验室自主研发的磁性复合微粒,具有良好的磁性响应性和药物缓释性能,本论文以交联葡聚糖磁性微粒为研究对象,以HepG2、LO2以及ECV-304三种细胞株为模型,通过细胞毒理学方法对其安全性进行了评价,并研究了两者之间的相互作用,取得了一系列有意义的结果：1.MTT分析法：以人源肝癌细胞HepG2为研究对象,对MTT分析法的实验方法进行了一定的改进,使其适用于交联葡聚糖磁性微粒的细胞毒性研究。并对交联葡聚糖磁性微粒对MTT还原反应的影响进行了初步的探索2.通过细胞形态学观察,改良MTT法,细胞生长曲线的测定以及流式细胞术,从不同角度对交联葡聚糖磁性微粒的细胞毒性进行了分析。从实验结果可以得出,在浓度为50-2000μg/mL的范围内,交联葡聚糖磁性微粒没有明显的细胞毒性。3.利用MTT法、焦点共聚焦显微镜和透射电子显微镜,对交联葡聚糖磁性微粒与细胞间的相互作用进行了初步的探索。实验结果证实HepG2细胞对交联葡聚糖磁性微粒具有很强的吸附作用,并且可以以胞吞的方式摄入该磁粒。

全文目录


中文摘要  3-4
Abstract  4-8
第一章 绪论  8-18
  1 纳米毒理学研究概述  8-9
  2 纳米毒理学的体外研究  9-15
    2.1 纳米颗粒体外细胞摄入和定位的检测  9-11
      2.1.1 电镜法测定纳米颗粒的细胞摄入  10-11
      2.1.2 荧光分析技术测定纳米颗粒的细胞摄入  11
    2.2 纳米颗粒细胞毒性的研究方法  11-15
      2.2.1 纳米颗粒对细胞代谢活性影响的评估方法  12-13
      2.2.2 纳米颗粒对细胞膜完整性影响的评估方法  13
      2.2.3 纳米颗粒引起细胞凋亡的评估方法  13-14
      2.2.4 纳米颗粒引起DNA损伤的评估方法  14-15
      2.2.5 纳米颗粒引起氧化应激的标志物与检测方法  15
  3 葡聚糖磁性微粒的研究概况  15-16
  4 论文的研究目的和意义  16-18
第二章 MTT分析法的改进及交联葡聚糖磁性微粒对MTT法影响的初步探索  18-30
  1. 实验材料和实验仪器  18-19
    1.1 实验材料  18
    1.2 实验仪器及耗材  18-19
    1.3 溶液配制  19
  2 实验方法  19-23
    2.1 HepG2细胞株的复苏  20
    2.2 HepG2细胞株的传代培养  20
    2.3 传统MTT法对交联葡聚糖磁性微粒细胞毒性的评估  20-21
    2.4 改良MTT法对交联葡聚糖磁性微粒细胞毒性的评估  21-22
    2.5 交联葡聚糖磁性微粒对MTT法影响的初探  22-23
      2.5.1 不同介质中交联葡聚糖磁性微粒与MTT反应的研究  22
      2.5.2 RPMI 1640培养基中参与交联葡聚糖磁性微粒催化MTT还原反应的成分分析  22-23
  3. 实验结果与讨论  23-28
    3.1 传统MTT法对交联葡聚糖磁性微粒细胞毒性评估的分析  23-24
    3.2 改良MTT法对交联葡聚糖磁性微粒细胞毒性评估的分析  24-26
    3.3 RPMI 1640培养基中交联葡聚糖磁性微粒对MTT还原反应的作用  26-28
  4 本章小结  28-30
第三章 交联葡聚糖磁性微粒的细胞毒性分析  30-44
  1. 实验材料与仪器  30-32
    1.1 材料与试剂  30
    1.2 实验仪器  30-31
    1.3 溶液配制  31-32
  2. 实验方法  32-35
    2.1 交联葡聚糖磁性微粒处理后细胞形态变化的观察  32
    2.2 改良MTT法分析经交联葡聚糖磁性微粒处理后细胞的存活率  32-33
    2.3 交联葡聚糖磁性微粒处理后细胞生长曲线的测定  33-34
    2.4 荧光标记法测定交联葡聚糖磁性微粒的细胞毒性  34-35
      2.4.1 交联葡聚糖磁性微粒处理后的细胞荧光染色观察  34
      2.4.2 流式细胞术检测经交联葡聚糖磁性微粒处理后的细胞存活率  34-35
  3 实验结果与讨论  35-42
    3.1 交联葡聚糖磁性微粒处理后细胞形态变化  35-36
    3.2 通过改良MTT法测定的经交联葡聚糖磁性微粒暴露后的细胞存活率  36-37
    3.3 交联葡聚糖磁性微粒暴露后细胞生长速率的变化  37-39
    3.4 交联葡聚糖磁性微粒处理后细胞荧光染色结果  39-40
    3.5 交联葡聚糖磁性微粒处理后细胞的流失细胞术分析  40-42
  4 本章小结  42-44
第四章 交联葡聚糖磁性微粒与细胞间的相互作用  44-54
  1. 实验材料与仪器  44-46
    1.1 材料与试剂  44
    1.2 实验仪器  44-45
    1.3 溶液配制  45-46
  2. 实验方法  46-48
    2.1 MTT法研究HepG2细胞对交联葡聚糖磁性微粒与吸附作用  46
    2.2 扫描电镜观察交联葡聚糖磁性微粒与HepG2细胞间的相互作用  46-47
    2.3 交联葡聚糖磁性微粒与细胞间的相互作用  47-48
      2.3.1 交联葡聚糖磁性微粒FITC修饰  47
      2.3.2 焦点共聚焦显微镜观察交联葡聚糖磁性微粒与细胞的相互作用  47-48
    2.4 透射电镜观察交联葡聚糖磁性微粒与HepG2细胞的相互作用  48
  3. 实验结果与讨论  48-53
    3.1 MTT法分析交联葡聚糖磁性微粒与HepG2细胞的吸附作用  48-49
    3.2 扫描电镜观察交联葡聚糖磁性微粒与HepG2细胞的吸附作用  49-50
    3.3 共聚焦显微镜观察FITC-交联葡聚糖磁性微粒与HepG2细胞的相互作用  50-52
    3.4 透射电镜观察交联葡聚糖磁性微粒与HepG2细胞的相互作用  52-53
  4 本章小结  53-54
全文总结  54-56
参考文献  56-64
致谢  64

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中图分类: > 医药、卫生 > 预防医学、卫生学 > 卫生基础科学 > 卫生毒理
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