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油茶蒲醇提物抑制5α-还原酶及对前列腺疾病的作用

作　者: 罗晓伟
导　师: 沈建福
学　校: 浙江大学
专　业: 食品科学
关键词: 油茶蒲皂素多酚黄酮 5α-还原酶前列腺增生前列腺癌 PC-3
分类号: R697.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

实验室前期研究表明,油茶蒲醇提物具有强抗氧化、抑制肿瘤细胞增殖、抑制小鼠腹水Si80瘤生长,降脂减肥的功能。小范围试用人群表明,油茶蒲醇提物能减轻前列腺增生的症状。本文重点研究了油茶蒲醇提物对5α-还原酶的抑制能力以及它对与此酶相关的前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PCa)的作用。主要的研究内容和结果如下：(1)通过比较精密度、回收率和稳定性,确定采用香草醛-冰醋酸-高氯酸法测定提取物中总皂素,Folin-Ciocalteau法测定总酚,紫外法测定总黄酮。油茶蒲醇提物中含27.35%皂素,22.41%多酚,2.81%黄酮；正丁醇相中皂素含量最高,达44.05%；乙酸乙酯相中多酚含量最高,达35.34%。正丁醇相过D101树脂,经乙醇梯度洗脱后,多酚主要集中在20%乙醇(20AL)和40%乙醇(40AL)洗脱相中,皂素在各个洗脱相中均有分布。(2)利用分光光度法建立5α-还原酶的体外筛选模型：睾酮20μM, NADPH 40μM,酶提取液216μg,在含有DTT 1 mM,磷酸钠40 mM, pH6.5的缓冲溶液中,37℃反应4 min。在此条件下加入10μg/mL醇提物体,·体系内5α-还原酶的剩余活性(RA)为54.92%±9.31%；乙酸乙酯相和正丁醇相抑制酶活的能力都增强,同浓度下RA分别为30.58%+0.65%和20.71%±0.54%；正丁醇相的乙醇洗脱物中40AL活性明显增强,RA仅为3.18%±2.81%。(3)在丙酸睾酮致大鼠前列腺增生模型中,油茶蒲醇提物可降低大鼠前列腺重、前列腺指数,增加第22天的尿流量(高剂量组P<0.05),降低前列腺上皮细胞的高度。在肥胖小鼠模型中,油茶蒲醇提物中剂量组(P<0.05)和高剂量组(P<0.01)均显著地降低肥胖小鼠的前列腺指数。(4)油茶蒲醇提物可抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖,48 h半抑制浓度IC50为151.6μg/mL;正丁醇相抑制PC-3细胞的能力增强,48 h的IC50为54.8μg/mL;正丁醇相过D101大孔树脂后,20AL和40AL的抑制活性减弱,60%乙醇洗脱相(60AL)和80%乙醇洗脱相(80AL)的活性增强；60AL和80AL在48h的IC50分别为43.0μg/mL和28.1μg/mL。通过形态学观察和吖啶橙染色可以发现,60AL和80AL可以诱导PC-3细胞凋亡。综上所述,油茶蒲醇提物可有效地抑制5α-还原酶的活性,改善丙酸睾酮致前列腺增生大鼠和肥胖小鼠前列腺增生的症状,抑制PC-3细胞的增殖,诱导癌细胞凋亡。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
缩略词表  7-11
第一章绪论  11-30
  1.1 5α-还原酶的概述和分类  12-14
  1.2 5α-还原酶与前列腺生长和前列腺疾病的关系  14-17
    1.2.1 5α-还原酶对前列腺生长发育的作用  14-15
    1.2.2 5α-还原酶在前列腺增生组织中的表达  15
    1.2.3 5α-还原酶在前列腺癌组织中的表达  15-17
  1.3 5α-还原酶活性的测定  17-18
    1.3.1 5α-还原酶的来源  17
    1.3.2 5α-还原酶活性测定方法  17-18
  1.4 5α-还原酶抑制剂  18-24
    1.4.1 5α-还原酶抑制剂治疗前列腺增生的临床试验  20-22
    1.4.2 5α-还原酶抑制剂治疗前列腺癌  22-24
  1.5 油茶蒲的研究进展  24-28
    1.5.1 油茶蒲的简介  24-25
    1.5.2 油茶的产量现状  25
    1.5.3 油茶蒲的成分分析  25-26
    1.5.4 油茶蒲的抗氧化性  26
    1.5.5 油茶肉质果成分分析及活性介绍  26-27
    1.5.6 本实验室对油茶蒲的前期研究  27-28
  1.6 本文研究的依据、目的和主要内容  28-30
    1.6.1 研究的依据和目的  28
    1.6.2 主要研究内容  28-30
第二章油茶蒲醇提物样品的制备及次生代谢产物的测定  30-38
  2.1 引言  30
  2.2 材料试剂和仪器  30-31
    2.2.1 材料试剂  30-31
    2.2.2 实验仪器  31
  2.3 实验方法  31-33
    2.3.1 油茶蒲醇提物的分级萃取(四部位法)  31
    2.3.2 正丁醇相大孔树脂梯度洗脱  31
    2.3.3 总皂素的定量测定  31-32
    2.3.4 总酚的定量测定  32
    2.3.5 总黄酮的定量测定  32-33
    2.3.6 统计学处理  33
  2.4 实验结果及讨论  33-37
    2.4.1 油茶蒲醇提物各分级相的得率  33
    2.4.2 正丁醇相的大孔树脂洗脱物  33-34
    2.4.3 化学成分测定方法比较  34
    2.4.4 化学成分的测定结果  34-36
    2.4.5 讨论  36-37
  2.5 本章结论  37-38
第三章体外研究油茶蒲醇提物抑制5α-还原酶的活性  38-48
  3.1 引言  38
  3.2 材料试剂和仪器  38-39
    3.2.1 材料试剂  38
    3.2.2 实验仪器  38-39
    3.2.3 试剂的配制  39
  3.3 实验方法  39-42
    3.3.1 大鼠5α-还原酶的制备  39
    3.3.2 蛋白质含量测定  39-40
    3.3.3 NADPH标准曲线测定  40-41
    3.3.4 5α-还原酶体外筛选模型的建立  41
    3.3.5 反应体系稳定性和米氏常数的测定  41
    3.3.6 油茶蒲醇提物抑制活性的测定  41
    2.3.7 统计学处理  41-42
  3.4 实验结果及讨论  42-47
    3.4.1 确定睾酮的浓度  42
    3.4.2 确定NADPH的浓度  42-43
    3.4.3 确定5α-还原酶提取物的用量  43-44
    3.4.4 确定反应的温度  44
    3.4.5 5α-还原酶催化体系的稳定性  44
    3.4.6 5α-还原酶的米氏常数  44-45
    3.4.7 油茶蒲醇提物对5α-还原酶的抑制活性  45-46
    3.4.8 讨论  46-47
  3.5 本章结论  47-48
第四章体内油茶蒲醇提物抑制前列腺增生  48-56
  4.1 引言  48
  4.2 材料试剂和仪器  48-49
    4.2.1 材料试剂  48
    4.2.2 实验仪器  48-49
  4.3 实验方法  49-50
    4.3.1 丙酸睾酮致大鼠前列腺增生模型  49-50
    4.3.2 小鼠肥胖模型前列腺增生  50
    4.3.3 统计学处理  50
  4.4 实验结果及讨论  50-55
    4.4.1 大鼠前列腺指数  50-51
    4.4.2 大鼠24h代谢尿量  51
    4.4.3 大鼠肝脏5α-原酶的活性  51-52
    4.4.4 大鼠前列腺病理切片  52-53
    4.4.5 肥胖小鼠前列腺指数  53-54
    4.4.6 讨论  54-55
  4.5 本章结论  55-56
第五章油茶蒲醇提物对前列腺癌细胞PC-3的抑制作用  56-65
  5.1 引言  56
  5.2 材料试剂和仪器  56-58
    5.2.1 材料试剂  56
    5.2.2 实验仪器  56-57
    5.2.3 试剂的配制  57-58
  5.3 实验方法  58-59
    5.3.1 人前列腺癌PC-3细胞的培养  58
    5.3.2 MTT法测定PC-3细胞增殖  58-59
    5.3.3 COE-60AL和COE-80AL对PC-3细胞形态的影响  59
    5.3.4 吖啶橙染色检验细胞凋亡  59
    5.3.5 统计学处理  59
  5.4 实验结果及讨论  59-64
    5.4.1 油茶蒲醇提物及分离产物对PC-3增殖的抑制作用  59-62
    5.4.2 60AL和80AL对PC-3细胞形态的影响  62-63
    5.4.3 60AL和80AL对PC-3细胞凋亡的影响  63-64
    5.4.4 讨论  64
  5.5 本章总结  64-65
第六章结论及展望  65-67
致谢  67-68
参考文献  68-76

油茶蒲醇提物抑制5α-还原酶及对前列腺疾病的作用

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