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带科绦虫8ku诊断抗原蛋白基因家族的研究

作　者: 王玉朝
导　师: 才学鹏；岳城
学　校: 新疆农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 带科绦虫 8 ku蛋白家族基因 AgB1基因 AgB2基因诊断抗原
分类号: S852.734
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:克隆和分析带科绦虫中牛带绦虫和细粒棘球绦虫的8 ku诊断抗原蛋白家族基因。①从分子水平上找出牛带绦虫8 ku诊断抗原蛋白家族基因各成员基因的变异规律,以此期望筛选出具有潜在应用价值的抗原基因,阐明引起带科绦虫病(绦虫蚴病)血清学交叉反应的分子基础,也为带科绦虫8 ku蛋白家族的分子进化分析提供资料。②对棘球蚴的重要诊断基因AgB1和AgB2进行克隆和表达,为下一步AgB1和AgB2抗原的血清学检测及效果评价奠定一定的基础。方法:①以牛带绦虫六钩蚴为对象从DNA水平和cDNA水平对8 ku蛋白家族基因进行克隆与序列测定,用分子生物学软件对各序列进行同源性分析和带科绦虫8 ku蛋白家族基因分子系统进化树分析。②以青海源细粒棘球蚴为对象,采用RT-PCR方法对AgB1和AgB2基因进行克隆,构建原核表达系统对其进行表达。结果:①筛选了224个8 ku蛋白家族基因阳性克隆重组子,测序,通过序列比对发现共存在3型23个不同基因序列,其中A型2个,阅读框大小为216 bp,编码72个氨基酸;B型2个,阅读框大小为249 bp,编码83个氨基酸;C型19个,阅读框大小为258 bp,编码86个氨基酸。氨基酸序列同源性比对发现TSA8KD-14基因与其它成员基因序列差异很大,比较特殊。②带科绦虫8 ku蛋白家族基因分子系统进化树分析可以发现牛带绦虫TSA8KD-1基因、TSA8KD-2基因、TSA8KD-3基因、TSA8KD-4基因、TSA8KD-5基因、TSA8KD-11基因、TSA8KD-12基因和TSA8KD-17基因和猪囊虫重要诊断抗原基因TsRS1、TsRS2和Ts14亲缘关系很近。③克隆的AgB1、AgB2基因开放阅读框大小分别为198 bp和213 bp,以GST融合形式表达的蛋白约为34 ku。结论:①首次克隆到牛带绦虫8 ku蛋白家族基因;②牛带绦虫TSA8KD-1基因、TSA8KD-2基因、TSA8KD-3基因、TSA8KD-4基因、TSA8KD-5基因、TSA8KD-11基因、TSA8KD-12基因和TSA8KD-17基因可能是牛带绦虫病的重要免疫诊断抗原基因;③与Genebank登录的AgB1和AgB2基因相比对,AgB1的相似性为97 %,AgB2相似性为100 %;④AgB1和AgB2最佳诱导表达条件为:2×YT培养基、诱导温度37℃、IPTG诱导剂量0.1 mmol/L、诱导时间为6 h。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第1章绪论  8-19
  1.1 带科绦虫(蚴)病概述  8-9
  1.2 带科绦虫(蚴)病诊断方法研究进展  9-16
  1.3 带科绦虫(蚴)病免疫预防  16-18
  1.4 本实验的目的与意义  18-19
第2章牛带绦虫8 ku 蛋白家族基因的克隆和序列分析  19-38
  2.1 实验目的  19
  2.2 实验材料  19-20
  2.3 实验方法  20-27
  2.4 实验结果  27-35
  2.5 分析与讨论  35-38
第3章 EgAgB1 和 EgAgB2 基因的克隆与表达  38-47
  3.1 实验目的  38
  3.2 实验材料  38-39
  3.3 实验方法  39-43
  3.4 结果  43-46
  3.5 分析与讨论  46-47
第4章结论  47-49
参考文献  49-55
附录  55-62
致谢  62-63
作者简介  63

带科绦虫8ku诊断抗原蛋白基因家族的研究

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