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结核分枝杆菌培养滤液蛋白32的克隆表达及血清学诊断应用

作　者: 毕爱笑
导　师: 胡忠义
学　校: 苏州大学
专　业: 病原生物学
关键词: 分枝杆菌,结核诊断抗原 CFP32蛋白
分类号: R446.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的:构建结核分枝杆菌培养滤液蛋白32(culture filtrate protein 32,CFP32)的重组质粒,在大肠杆菌中表达并纯化重组蛋白CFP32,探讨其在结核病血清学诊断中的应用价值。方法:PCR扩增CFP32基因片段,将其克隆到pET-21a表达载体。优化表达条件,Ni-NTA亲和层析方法纯化重组CFP32蛋白。建立检测CFP32抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,并用于检测160例临床血清标本中的CFP32抗体。结果:克隆了cfp32基因,构建了表达质粒pET21a-cfp32,IPTG诱导在大肠杆菌中得到高表达CFP32蛋白包涵体,SDS-PAGE电泳在30 KD处得到条带,纯化得到高纯度CFP32蛋白,PBS复性后测得蛋白含量为3.46 mg/mL。建立并优化了CFP32检测结核抗体的ELISA方法。97例临床确诊的肺结核患者中62例CFP32抗体阳性,敏感性为63.9%;25例非结核病患者和38例健康人血清CFP32抗体阳性2例,特异性为96.8%。结论:成功在大肠杆菌中获得高效表达CFP32蛋白,血清抗体检测表明重组的CFP32蛋白有希望成为结核病血清学诊断的有效候选蛋白之一。

全文目录

中文摘要  3-4
Abstract  4-6
引言  6-8
第一部分结核分枝杆菌CFP32 蛋白克隆、表达和纯化  8-25
  材料和方法  8-18
  结果  18-22
  讨论  22-25
第二部分血清抗体检测  25-32
  材料和方法  25-28
  结果  28-30
  讨论  30-32
小结  32-33
参考文献  33-37
综述结核分枝杆菌分泌蛋白及其在实验室诊断研究进展  37-49
附图一 PMD18-T 的克隆区  49-53
缩略语表  53-55
攻读学位期间发表文章  55-56
致谢  56-57
详细摘要  57-59

结核分枝杆菌培养滤液蛋白32的克隆表达及血清学诊断应用

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