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在鳗弧菌表面展示嗜水气单胞菌抗原蛋白GAPDH

作　者: 赵艳
导　师: 张元兴；刘琴
学　校: 华东理工大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 嗜水气单胞菌鳗弧菌表面展示 3-磷酸甘油醛脱氢酶多效价疫苗
分类号: S941
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 35次
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内容摘要

随着我国水产养殖规模的不断扩大,各种问题也逐渐显露。其中鱼类病害问题尤为严重。滥用抗生素导致的严重后果,使得免疫接种再度成为疾病控制的主要策略。疫苗开发的新策略之一,就是以病原体细菌的减毒株为活菌载体,通过在其表面展示保护性外源蛋白来开发多效价疫苗。该项工作俨然已是疫苗开发的研究新热点。在本实验室的前期工作中,我们已经通过基因工程手段构建了一株安全高效的鳗弧菌减毒活疫苗株MVAV6203,并以该菌株为宿主,构建了一系列异源蛋白表面展示系统,实验证明上述系统可以很好的将GFP蛋白展示到鳗弧菌减毒活疫苗株的细胞表面。在本研究中,我们基于前期构建的7个表面展示系统,选取来源于嗜水气单胞菌野生株LSA34的GAPDH蛋白为保护性抗原蛋白,将其编码基因与展示系统融合,构建了7个表面展示GAPDH鳗弧菌候选株,后续的蛋白表达及表面展示相关检测实验证明：基于冰核蛋白展示系统构建的展示菌株AV/pN-gapA对GAPDH具有相对较高的展示效率,是一株潜在的鳗弧菌多效价载体疫苗候选株。针对鳗弧菌载体疫苗候选株AV/pN-gapA,我们在山东大菱鲆养殖基地开展了免疫保护力评价,实验结果表明：经注射免疫后,疫苗株能够诱导大菱鲆产生针对野生型鳗弧菌MVAV425(RPS 80%)和野生型嗜水气单胞菌LSA34 (RPS 60%)的相对免疫保护力,具有潜在的开发应用价值。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-9
第1章文献综述  9-19
  1.1 海洋鱼类养殖常见病原体  9-11
    1.1.1 海洋鱼类细菌性病原体鳗弧菌  9-10
    1.1.2 海洋鱼类细菌性病原体嗜水气单胞菌  10-11
  1.2 鱼用疫苗的研究概况  11-14
    1.2.1 疫苗发展简史  11-12
    1.2.2 鱼用疫苗分类  12-14
    1.2.3 鱼用疫苗接种方法  14
  1.3 细菌表面展示系统  14-17
    1.3.1 细菌表面展示系统简介  14-15
    1.3.2 基于INP的细菌表面展示系统  15-16
    1.3.3 基于lpp-ompA的细菌表面展示系统  16-17
  1.4 3-磷酸甘油醛脱氢酶  17
  1.5 本论文的主要内容和意义  17-19
第2章在鳗弧菌中表达并展示外源蛋白GAPDH  19-41
  2.1 引言  19
  2.2 材料与方法  19-29
    2.2.1 实验材料  19-22
    2.2.2 实验方法  22-29
  2.3 结果与讨论  29-41
    2.3.1 gapA基因序列  29
    2.3.2 外源蛋白GAPDH的展示质粒构建策略  29-30
    2.3.3 外源蛋白基因gapA的克隆及载体质粒制备  30-32
    2.3.4 外源蛋白GAPDH展示质粒的扩增与鉴定  32
    2.3.5 含有外源蛋白GAPDH展示质粒的展示菌株的构建  32-34
    2.3.6 鳗弧菌展示菌株外源蛋白质GAPDH总表达量检测  34-35
    2.3.7 GAPDH在展示菌株AV/pN-gapA中的展示效率  35-37
    2.3.8 AV/pN-gapA发酵培养  37-41
  2.4 本章小结  41
第3章在大菱鲆中评价鳗弧菌载体疫苗的效果  41-50
  3.1 引言  41
  3.2 材料与方法  41-43
    3.2.1 实验材料  41
    3.2.2 实验方法  41-43
  3.3 结果与讨论  43-48
    3.3.1 生长曲线测定  43
    3.3.2 Western blot分析不同时间点的GAPDH蛋白表达及展示情况  43-44
    3.3.3 野生株鳗弧菌MVAV425对大菱鲆的半致死剂量(LD_(50))  44-45
    3.3.4 AV/pN-gapA对大菱鲆免疫保护效果的评价  45-48
  3.4 本章小结  48-50
第4章总结与展望  50-54
  4.1 全文总结  50-51
  4.2 展望  51-54
参考文献  54-57
致谢  57

在鳗弧菌表面展示嗜水气单胞菌抗原蛋白GAPDH

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