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在减毒鳗弧菌中采用多种方法表达迟钝爱德华氏菌抗原GAPDH以及多价疫苗的构建和评价

作　者: 郑雁
导　师: 刘琴
学　校: 华东理工大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 多价载体疫苗 迟钝爱德华氏菌 鳗弧菌 抗原表达
分类号: R392.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


随着基因工程技术的飞速发展,多价减毒活疫苗技术已被广泛应用到了水产养殖业中。本课题以实验室前期成功开发的鳗弧菌减毒活疫苗MVAV6203为载体,以迟钝爱德华氏菌保护性抗原蛋白GAPDH为靶标蛋白,通过比较高拷贝质粒与中低拷贝质粒介导抗原表达方式,胞内表达抗原与表面展示表达抗原方式,体内诱导启动子与组成型启动子表达抗原方式,在斑马鱼系统中进行了不同抗原表达策略下的免疫保护效果评价。研究结果表明：由低拷贝质粒介导,组成型启动子启动表达,冰核蛋白介导抗原表面展示的情况下,鳗弧菌多价疫苗候选株MVAV6203 (patLNG40)对鳗弧菌和迟钝爱德华氏菌表现出了最佳的免疫保护效果。本研究进一步对获得的鳗弧菌多价疫苗候选株在大菱鲆中进行了免疫/攻毒实验评价,实验结果表明：该疫苗株注射免疫大菱鲆30天后,能针对鳗弧菌和迟钝爱德华氏菌的注射攻毒产生超过70%的免疫保护力,具有较好的产品开发潜力。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-9
第1章 综述与导言  9-18
  1.1 海洋鱼类养殖及疾病控制  9-11
    1.1.1 海水养殖细菌性病原菌鳗弧菌  9-10
    1.1.2 海水养殖细菌性病原菌迟钝爱德华氏菌  10-11
    1.1.3 海水养殖中的疾病控制  11
  1.2 鱼类疫苗研究近况  11-13
    1.2.1 灭活疫苗  12
    1.2.2 减毒活疫苗  12
    1.2.3 载体疫苗  12
    1.2.4 多价疫苗  12-13
  1.3 细菌表面展示系统  13-14
    1.3.1 细菌表面展示系统简介  13-14
    1.3.2 基于冰核蛋白的表面展示系统  14
    1.3.3 基于Lpp-OmpA的表面展示系统  14
  1.4 质粒稳定性  14-16
    1.4.1 质粒稳定性简介  14-15
    1.4.2 体内诱导启动子  15
    1.4.3 质粒复制区及稳定性  15-16
  1.5 3-磷酸甘油醛脱氢酶  16
  1.6 研究目的与意义  16-18
第2章 在鳗弧菌中比较异源抗原的胞内表达及表面展示  18-35
  2.1 引言  18
  2.2 材料与方法  18-27
    2.2.1 实验材料  18-21
    2.2.2 实验方法  21-27
  2.3 结果与分析  27-32
    2.3.1 外源蛋白GAPDH的胞内表达与表面展示的构建策略  27-28
    2.3.2 展示质粒的构建与鉴定  28-30
    2.3.3 鳗弧菌展示菌株外源蛋白质GAPDH总表达量检测  30
    2.3.4 GAPDH在展示菌株6203(ptLNG40)中的展示效率  30-32
  2.4 在斑马鱼模型上评价胞内展示菌和表面展示菌株的免疫保护率  32-33
  2.5 结论与讨论  33-35
第3章 在鳗弧菌中比较异源抗原的体内诱导表达和组成型表达  35-43
  3.1 引言  35
  3.2 材料与方法  35-37
    3.2.1 实验材料  35-37
    3.2.2 实验方法  37
  3.3 结果与分析  37-41
    3.3.1 采用体内诱导启动子在pUTt中启动融合蛋白的表达  37-41
    3.3.2 在斑马鱼模型上评价体内诱导表达和组成型表达菌株的免疫保护率  41
  3.4 结论与讨论  41-43
第4章 在鳗弧菌中比较高拷贝质粒和中低拷贝质粒介导的抗原表达  43-50
  4.1 引言  43
  4.2 材料与方法  43-45
    4.2.1 实验材料  43-44
    4.2.2 实验方法  44-45
  4.3 结果与分析  45-48
    4.3.1 在中低拷贝质粒中利用组成型启动子和表面展示系统表达抗原蛋白  45-48
    4.3.2 在斑马鱼系统中检测6203(patLNG40)的免疫保护率  48
  4.4 结论与讨论  48-50
第5章 在大菱鲆中评价多价疫苗候选株的保护效果  50-54
  5.1 引言  50
  5.2 材料与方法  50-51
    5.2.1 实验材料  50
    5.2.2 实验方法  50-51
  5.3 结果与分析  51-53
    5.3.1 实验方法免疫分组情况  51
    5.3.2 免疫保护力测评  51-53
  5.4 结论与讨论  53-54
第6章 结论与展望  54-56
参考文献  56-60
致谢  60

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学 > 免疫生物学
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