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栝楼种质资源收集及遗传多样性研究

作　者: 李慧慧
导　师: 高燕会
学　校: 浙江农林大学
专　业: 林木遗传育种
关键词: 栝楼亲缘关系农艺性状 ISSR 组织培养
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

栝楼（Trichosanthes kirilowii Maxim.）为葫芦科栝楼属多年生草质藤本,国内主要分布在浙江、安徽、河南、江西、山西等地。为此,本研究结合形态学、分子生物学以及组织解剖学对从浙江、安徽、山西、江西、河南等不同产地的栝楼进行遗传多样性分析,旨在为选育栝楼的新品种提供依据,同时建立组织培养再生体系,通过主要农艺性状、ISSR分子标记、组织解剖学以及组织培养的研究,其结果如下:1、不同采集地栝楼的主要农艺性状（栝楼种子的纵径、横径及纵横比、百粒重）群体间和群体内均存在显著差异。根据不同产地叶片苗期形态特征可将栝楼划分为3大类型:第一种类型叶浅绿大,卵状心形边缘具疏齿,为安徽野生类型;第二种类型为叶深绿,卵状心形边缘具疏齿,锐尖,为食籽型栝楼;第三种类型叶深绿,裂片菱状卵状心形稍圆边缘具疏齿,叶大油亮光滑,属于药食两用型栝楼。2、本研究建立了栝楼ISSR-PCR反应体系,筛选出的15条ISSR引物共扩增出112个位点,多态性位点101个,多态性比率为90%。依据ISSR标记数据建立了栝楼的遗传距离和遗传相似系数矩阵,构建其分子树状图。结果表明不同产地的34份栝楼种质可分为食籽型栝楼、药食两用型栝楼和野生型3大类,说明栝楼种质之间存在着较高的遗传多样性,这与传统的分类结果基本一致。3、本研究通过对栝楼的叶片、茎段和叶柄进行组织解剖学研究,结果表明,不同采集地叶片、茎和叶柄的组织解剖结构性状是比较稳定的,这与不同地区的叶片的形态描述是不相同的,与传统的分类结果不一致。4、以栝楼的叶片、茎段和带芽茎段为外植体,通过不同的生长激素对栝楼愈伤组织诱导、丛生芽诱导以及生根的影响,从而建立起栝楼的组织培养再生体系,栝楼叶片愈伤组织诱导和带芽茎段的丛生芽诱导的最佳培养基均为MS+3.0 mg·L₁ 6-BA,最佳生根培养基为1/2MS+0-0.5 mg·L₁NAA。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
引言  9-10
第一章文献综述  10-16
  1.1 栝楼的遗传育种  10-11
  1.2 栝楼的繁育和栽培技术  11-12
  1.3 栝楼化学成分研究进展  12-13
    1.3.1 栝楼果实营养成分  12
    1.3.2 栝楼种籽成分  12-13
    1.3.3 天花粉蛋白  13
  1.4 栝楼分子生物学的研究  13-14
  1.5 栝楼组织细胞学研究  14-15
  1.6 存在问题及研究的目的意义  15-16
第二章不同种植地区栝楼主要农艺性状的研究  16-24
  2.1 材料与方法  16
    2.1.1 实验材料  16
    2.1.2 实验方法  16
      2.1.2.1 苗期生长情况调查  16
      2.1.2.2 形态观察  16
  2.2 结果与分析  16-23
    2.2.1 栝楼苗期株高生长量的观测  16-17
    2.2.2 不同采集地栝楼形态变异规律的研究  17-23
      2.2.2.1 不同采集地栝楼苗期叶片形态变异规律  17-18
      2.2.2.2 栝楼群体间种子性状变异特征  18-20
      2.2.2.3 栝楼群体内种子性状变异特征  20
      2.2.2.4 食籽和药食两用栝楼种子性状与产地之间的关系  20-21
      2.2.2.5 栝楼群体种子性状聚类分析  21-23
  2.3 讨论  23-24
第三章基于 ISSR 的栝楼遗传多样性分析  24-32
  3.1 材料与方法  24-26
    3.1.1 实验材料  24
    3.1.2 实验方法  24-26
      3.1.2.1 栝楼基因组DNA 的提取  24
      3.1.2.2 ISSR-PCR 体系的建立  24-25
      3.1.2.3 ISSR-PCR 扩增和产物检测  25
      3.1.2.4 数据统计与分析  25-26
  3.2 结果与分析  26-30
    3.2.1 栝楼ISSR-PCR 扩增体系的建立  26-27
      3.2.1.1 正交试验的直观分析  26
      3.2.1.2 栝楼ISSR-PCR 退火温度选择  26-27
    3.2.2 栝楼ISSR-PCR 扩增产物的多态性分析  27-29
    3.2.3 聚类分析  29-30
  3.3 讨论  30-32
第四章不同产地栝楼组织解部学的研究  32-40
  4.1 材料与方法  32-33
    4.1.1 实验材料  32
    4.1.2 实验方法  32-33
  4.2 结果分析  33-38
    4.2.1 不同产地栝楼叶片切面结构  33-34
    4.2.2 不同产地栝楼茎的切面结构  34-35
    4.2.3 不同产地叶柄的切面结构  35-38
  4.3 讨论  38-40
    4.3.1 不同材料的石蜡切片制作的异同  38-39
    4.3.2 对不同栝楼材料的遗传多样性的分析  39-40
第五章栝楼组织培养再生培体系的建立  40-47
  5.1 材料与方法  40-42
    5.1.1 实验材料  40
    5.1.2 实验方法  40-42
      5.1.2.1 栝楼无菌培养体系的建立  40
      5.1.2.2 愈伤组织诱导培养  40-41
      5.1.2.3 不定芽的诱导培养  41
      5.1.2.4 栝楼小植株的生根培养  41-42
  5.2 结果与分析  42-46
    5.2.1 无菌培养体系的建立  42
    5.2.2 不同浓度的6-BA 与NAA 对栝楼外植体诱导的影响  42-44
    5.2.3 不定芽培养基的筛选  44-45
    5.2.4 生根培养基的筛选  45
    5.2.5 炼苗移栽  45-46
  5.3 讨论  46-47
第六章结论  47-49
参考文献  49-54
附录  54-55
个人简介  55-56
致谢  56

栝楼种质资源收集及遗传多样性研究

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