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UCP-2在软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗中的作用及机制探讨

作　者: 王立娟
导　师: 管小琴
学　校: 重庆医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 非酒精性脂肪肝胰岛素抵抗 IRS-2 PI-3K UCP-2
分类号: R575.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:1、探讨UCP-2在软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗中的表达及其作用。2、探讨UCP-2在软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗中的作用机制。方法:1.用含10%胎牛血清的1640培养基培养HepG2细胞,并进行常规传代。2、实验设立正常对照组、高胰岛素组、软脂酸组(PA组)和干预组。3、检测细胞培养液中与胰岛素抵抗及脂变相关的一些指标:葡萄糖、SOD、MDA、GGT、TG、ALT、ASL,油红O鉴定HepG2细胞脂肪变性情况,流式细胞术(FCM)检测细胞膜电位变化,RT-PCR、Western Blot检测UCP-2、IRS-2、PI-3K、NF-κBmRNA及蛋白水平表达变化。结果:1、HepG2细胞的胰岛素抵抗体外模型建立成功用葡萄糖氧化酶法检测细胞培养液中葡萄糖浓度,软脂酸组葡萄糖浓度和高胰岛素组无统计学差异(P>0.05),表明用软脂酸诱导HepG2细胞的胰岛素抵抗体外模型成功建立。2.对照组、软脂酸组、干预组的ALT、AST、TG,GGT的变化软脂酸组ALT、AST、TG,GGT水平明显高于其他两组(P<0.05),且有统计学意义,其他两组无明显差异,无统计学意义(P>0.05)。3.油红O染色观察各组细胞脂肪变性情况对照组和干预组细胞内可见少量橘红色脂滴,软脂酸组细胞内可见大量明显脂滴。4.流式细胞术检测细胞线粒体膜电位变化软脂酸组(PA组)膜电位降低,低于对照组和干预组,且有统计学意义(P<0.05)。5.各组UCP-2、IRS-2、PI-3K、NF-κBmRNA及蛋白表达的变化。与对照组和干预组相比,软脂酸组UCP-2、NF-κB蛋白表达明显升高(P<0.05),IRS-2、PI-3K则软脂酸组明显低于对照组和干预组(P<0.05),各组的mRNA表达水平随蛋白同步升高或降低。结论:1、软脂酸在体外成功诱导了HepG2细胞发生胰岛素抵抗,同时发生了脂肪变性。2、UCP2表达升高使线粒体膜电位降低,加重了细胞损害,加入抑制剂京尼平后,得到明显改善。3、通过检测和胰岛素信号传导通路相关的IRS-2、PI3K的表达水平,在PA组二者均降低,加入UCP-2抑制剂京尼平后,二者表达升高,提示UCP-2在肝脏胰岛素抵抗中起着重要作用,其机制可能和肝脏胰岛素抵抗的信号传导通路障碍有关。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
前言  12-13
1 材料和方法  13-24
2 实验结果  24-28
3 讨论  28-31
全文小结  31-32
参考文献  32-34
附图  34-37
综述文献  37-46
致谢  46-47
攻读硕士学位期间发表的学术论文目录  47

UCP-2在软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗中的作用及机制探讨

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