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苯并芘损伤胎盘绒毛组织机理及VE防护作用的研究

作　者: 邰贺
导　师: 陈亚琼；吴维光
学　校: 河北医科大学
专　业: 妇产科学
关键词: BaP 维生素E Bcl-2 Bax SOD活性 GSH-PX活性
分类号: R714.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:1观察小鼠妊娠前和妊娠早期BaP暴露所造成胎盘绒毛组织形态学改变;2研究BaP造成胎盘绒毛组织细胞损伤的作用机制;3研究维生素E是否对BaP的暴露起保护性作用;4为今后的临床研究和孕期保健提供一定的指导。方法:1实验动物的选择:将150只实验动物(ICR小鼠:雌鼠100只、雄鼠50只)随机分为5组,每组30只(雌鼠20只、雄鼠10只),雌、雄鼠分开饲养。2实验动物的分组对照组:雌鼠每天灌胃BaP(2mg/kg); 10mg/kg VE对抗组:雌鼠每天灌胃BaP(2mg/kg)+维生素E(10mg/kg); 20mg/kg VE对抗组:雌鼠每天灌胃BaP(2mg/kg)+维生素E(20mg/kg); 40mg/kg VE对抗组:雌鼠每天灌胃BaP(2mg/kg)+维生素E(40mg/kg);空白组:雌鼠每天灌胃相同体积的橄榄油。3实验动物的处理将所有的雌鼠灌胃15天后(三个动情周期),将雌鼠与不作任何处理的雄鼠同笼(每笼2只雌鼠,1只雄鼠),第2天查看雌鼠阴道外口出现精液栓表示怀孕第1天,雌鼠与雄鼠分开,将已受孕的小鼠继续上述处理7天(早期妊娠7天),最后一次灌胃后处死小鼠取出胎盘绒毛组织测定相关指标。4测定方法:4.1 RT-PCR法测定胎盘绒毛组织Bax与Bcl-2两目的基因的mRNA水平的表达情况;4.2用GSH-PX与SOD酶活性检测试剂盒检测胎盘绒毛组织的GSH-PX与SOD活性;4.3用HE染色法观察胎盘绒毛组织细胞的形态学改变;4.4免疫组织化学法检测胎盘绒毛组织Bax与Bcl-2两目的基因的蛋白水平表达情况,并在显微镜下观察其蛋白表达的具体位置。4.5使用SPSS10.0软件进行统计学分析结果:1胎盘绒毛组织凋亡相关基因Bax与Bcl-2基因的mRNA水平的表达量:小鼠给予2mg/kg.d后,胎盘绒毛组织Bax基因的mRNA水平表达量要显著高于空白组(P<0.01)。给予不同浓度的维生素E(10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d)后其Bax基因mRNA水平表达量随着维生素E剂量的加大而减少,但10mg/kg.d对抗组与20mg/kg.d对抗组相比无统计学差异(P=0.183>0.05),且10mg/kg.d对抗组与对照组无统计学差异(P=0.197>0.05)。Bcl-2基因的mRNA水平表达量要显著低于空白组(P<0.01),给予不同浓度的维生素E(10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d)后其Bcl-2基因的mRNA水平表达量随着维生素E剂量的加大而减少(P<0.05)。两基因的mRNA水平表达量比值随着维生素E剂量的加大而逐渐降低(P<0.01),显著低于对照组(P<0.05)。Bax与Bcl-2基因的mRNA水平表达量上存在一定的负相关关系(r=-0.951,P=0.002<0.01)。2胎盘绒毛组织细胞GSH-PX与SOD活性的改变:小鼠给予2mg/kg.d后胎盘绒毛组织细胞的GSH-PX与SOD活性均降低,显著低于空白组(P<0.01)。给予不同浓度的维生素E(10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d)后,GSH-PX与SOD的活性均较BaP(2mg/kg.d)组升高(P<0.05),随着维生素E剂量的加大两酶的活性均逐渐升高(P<0.05),但20mg/kg.d对抗组和40mg/kg.d对抗组GSH-PX活性无统计学差异(P=0.205>0.05)。3胎盘绒毛组织细胞的形态学改变:通过HE染色法在400倍镜下观察胎盘绒毛组织细胞形态学变化,发现小鼠给予2mg/kg.d后,胎盘绒毛组织细胞呈现细胞凋亡的典型特征:核膜皱缩,核固缩,核碎裂,且数量较空白组明显增多,给予不同浓度的维生素E(10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d)后其凋亡细胞的数量减少,且随着剂量的加大其数量逐渐减少。4胎盘绒毛组织凋亡相关基因Bax、Bcl-2基因的蛋白水平的表达量:小鼠给予2mg/kg.d后,胎盘绒毛组织Bax基因的蛋白水平表达量要显著高于空白组(P<0.01)。Bcl-2基因的蛋白水平的表达量显著低于空白组(P<0.01)。给予不同浓度的维生素E(10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d)后Bax基因的蛋白水平表达量逐渐减少(P<0.05)且随着维生素E剂量的加大而表达量逐渐减少(P<0.05),而Bcl-2基因的蛋白水平表达量逐渐升高(P<0.05)且随着维生素E剂量的加大而表达量逐渐升高(P<0.05)。两基因蛋白水平表达量比值随着维生素剂量的加大而逐渐降低(P<0.01),显著高于对照组(P<0.01)。Bax与Bcl-2基因的蛋白水平表达量之间存在一定的相关关系(r=-0.825,P= 0.021<0.05)。Bax基因的蛋白水平表达量与mRNA水平表达量上存在一定的相关关系(r=0.789,P=0.025<0.05),Bcl-2基因的蛋白水平表达量与其mRNA水平的表达量之间存在一定相关关系(r=0.972,P=0.018<0.05)。结论:1已证实小鼠孕前(15天)和孕早期7天BaP(2mg/kg.d)的暴露能促进胎盘绒毛组织细胞发生凋亡;2首次证实在胎盘绒毛组织中BaP能通过升高Bax基因mRNA水平和蛋白水平的表达量,降低Bcl-2基因mRNA水平和蛋白水平的表达量而促进细胞发生凋亡;3首次证实在胎盘绒毛组织中BaP通过降低GSH-PX与SOD酶活性而促进细胞发生凋亡;4维生素E能通过调节Bax、Bcl-2基因的mRNA水平和蛋白水平的表达量,升高GSH-PX与SOD的活性,从而抑制BaP所导致的胚胎绒毛组织细胞凋亡。

全文目录


中文摘要  4-7
英文摘要  7-11
英文缩写  11-13
研究论文 苯并芘损伤胎盘绒毛组织机理V_E防护作用的研究  13-68
  前言  13-14
  实验材料与方法  14-28
  结果  28-31
  附图  31-41
  附表  41-46
  讨论  46-59
  结论  59-60
  参考文献  60-68
综述 苯并芘暴露途径及其造成胚胎细胞损伤机理的研究  68-77
  参考文献  72-77
个人简历  77

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中图分类: > 医药、卫生 > 妇产科学 > 产科学 > 胎儿
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