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猪繁殖与呼吸综合征病毒的RNA多态性研究

作　者: 邱玲俐
导　师: 李国平；周伦江
学　校: 福建农林大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 mRNA差异显示技术多态性
分类号: S858.282.659.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 35次
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内容摘要

2006我国南方地区发生了以高热、高发病率、高死亡率为特征的传染病。而后蔓延到全国大部分养猪地区,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。该病于2006年7月传入福建省,之后在我省迅速蔓延传播。本试验的目的是利用mRNA差异显示技术,建立PRRSV多态性研究的方法,并通过此技术获得病毒变异相关基因片段。本实验采用mRNA差异显示技术,以实验室分离保存的普通型PRRSV-FJ02A株、变异型PRRSV-FJ06A株、变异型PRRSV-FJ07A株、变异型PRRSV-FJ08A株等4株病毒为实验材料,进行四株病毒的基因差异表达分析。采用3条锚定引物和20条随机引物进行mRNA差异显示试验,试验经过引物筛选、变性聚丙烯酰氨凝胶电泳、银染等过程最后筛选获得10条差异表达片段。将其中两条片段进行回收,将这两条片段分别连接到T载体上,然后转化到DH5α上,接着挑菌、提取质粒,通过酶切鉴定,筛选出阳性克隆,最后进行测序。测序结果表明:在这两个片段的两端均分别有mRNA差异显示技术所用引物的结合位点,片段大小也与PCR扩增出来的条带大小相一致,片段长度分别为209bp和272bp进一步证实了目的片段的正确性。使用NCBI的blast程序和DNASTAR软件;对这两个片段的进行序列分析,结果表明引物组合锚定1-S2差异片段与数据库中其他PRRSV全基因序列相似性较低。两个差异片段与VR2332株比较核苷酸同源性分别78.9%和68.6%。并且这两个片段分别在不同部位出现不同程度的碱基突变或缺失,因此初步推测这两个差异片段是可能导致PRRSV变异的片段,利用mRNA差异显示技术可以获得猪繁殖与呼吸综合征病毒变异的相关基因。

全文目录

中文摘要  7-8
ABSTRACT  8-10
第一章文献综述  10-22
  1 PRRSV 的分子生物学研究进展  10-14
    1.1 PRRSV 的病原特征  10
    1.2 PRRSV 的基因结构  10-11
    1.3 PRRSV 编码的蛋白和功能  11-14
    1.4 PRRSV 的遗传与变异  14
  2 PRRSV 的生物学特性  14-18
    2.1 PRRSV 的流行病学  14-15
    2.2 PRRS 的发病机理和临床症状  15-16
    2.3 PRRS 的病理变化  16
    2.4 PRRS 的诊断  16-18
  3 mRNA 差异显示技术的研究进展  18-22
    3.1 mRNA 差异显示技术原理和技术路线  18-19
    3.2 mRNA 差异显示技术的优缺点  19
    3.3 mRNA 差异显示技术在动物方面的应用  19-22
第二章 mRNA 差异显示试验  22-44
  1 材料与方法  22-35
    1.1 材料  22-23
    1.2 方法  23-35
  2 结果与分析  35-41
    2.1 RNA 检测结果  35
    2.2 第一批引物扩增的结果  35
    2.3 第一次扩增结果  35
    2.4 第二次扩增结果  35-36
    2.5 采用两种变性聚丙烯酰胺凝胶电泳设备对筛选出来的引物组合进行多态性电泳结果  36-38
    2.6 对四个病毒株特有多态性条带切胶回收结果  38-40
    2.7 回收片段的质粒 DNA 提取结果  40
    2.8 质粒DNA 的酶切检测结果  40
    2.9 回收片段测序结果  40-41
  3 讨论  41-43
  4 结论  43-44
参考文献  44-52
致谢  52

猪繁殖与呼吸综合征病毒的RNA多态性研究

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