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火鸡组织滴虫在火鸡体内的动态分布研究

作　者: 宋海燕
导　师: 刘毅
学　校: 湖南农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 火鸡组织滴虫鸡异刺线虫 PCR 动态分布 HE染色
分类号: S858.39
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

火鸡组织滴虫病(Histomoniasis)是由火鸡组织滴虫引起的原虫性传染疾病,主要发生于火鸡,产蛋鸡和雏鸡。鸡异刺线虫虫卵对火鸡组织滴虫有保护作用,使得其成为火鸡组织滴虫的主要传播媒介。本试验分离单条鸡异刺线虫及其虫卵的基础上,研究火鸡组织滴虫在鸡异刺线虫体内的分布情况以及鸡异刺线虫传播火鸡组织滴虫的机制；然后将含有火鸡组织滴虫的胚胎化的鸡异刺线虫虫卵经口腔感染火鸡,运用PCR方法检测不同时间内火鸡组织滴虫在火鸡体内的动态分布情况,从而探讨火鸡组织滴虫病的传播机理；同时观察火鸡感染火鸡组织滴虫各器官组织的病理学变化,研究火鸡组织滴虫感染与病理损伤的相互关系。本研究的第一部分是首次采集并分离单条鸡异刺线虫以及其虫卵,在此基础上,研究火鸡组织滴虫在鸡异刺线虫体内的分布情况。运用PCR方法检测可以发现鸡异刺线虫雄虫,有虫卵的鸡异刺线虫雌虫,未发育的鸡异刺线虫虫卵以及发育成熟的鸡异刺线虫虫卵中均有火鸡组织滴虫的存在。其带虫率分别为：45%,50%,65%,65%。而在雌性不含虫卵的鸡异刺线虫体内并未检测到火鸡组织滴虫的存在然后将上述鸡异刺线虫组分别经口腔感染火鸡,发现仅鸡异刺线虫雄虫和胚胎化的虫卵可以使火鸡爆发火鸡组织滴虫病,其发病率分别为20%,100%。本研究的第二部分将含有火鸡组织滴虫的胚胎化的鸡异刺线虫虫卵经口腔感染火鸡,运用PCR方法检测不同时间内火鸡组织滴虫在火鸡体内的动态分布情况。试验结果表明,最先检测到火鸡组织滴虫DNA的组织是盲肠,时间为感染后第6天,但直至感染后第8天,盲肠的阳性率才开始逐步增加；第二个检测到火鸡组织滴虫DNA的组织是无病变肝脏,时间为感染后第7天,但直至感染后第15天,无病变的阳性率才开始逐步增加。肝脏的眼观病变出现在感染后第8天,一旦肝脏出现眼观病变,在大多数的病变肝脏中都可以检测到火鸡组织滴虫的DNA；从第9天开始偶尔能在法氏囊中检测到火鸡组织滴虫DNA,但其感染率并未随时间的推移而增加；在感染后13天开始可以在试验火鸡的大脑、肺脏、心脏、肾脏和脾脏中检测到火鸡组织滴虫DNA。但在感染火鸡盲肠内容物、直肠、空-回肠、十二指肠、胰腺、腿部肌肉和血液中均未检测到火鸡组织滴虫的DNA。本研究的第三部分随机将试验火鸡的盲肠,直肠,空回肠,十二指肠,腺胃,肝脏(无病变),肝脏(有病变),脾脏,胰腺,法氏囊，肾,心,肺,脑以及腿部肌肉组织经HE染色,结果表明仅在试验火鸡盲肠,肝脏(无病变),肝脏(有病变)和脾脏中可以看见火鸡组织滴虫的特征性病变,其它组织的病变程度各不相同。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-11
第一章文献综述  11-22
  前言  11
  1 病原学  11-12
  2 流行病学  12-13
    2.1 易感动物  12
    2.2 宿主  12
    2.3 生活史  12-13
    2.4 发病季节  13
  3 检测方法  13-18
    3.1 传统检测方法  13-14
    3.2 聚合酶链式反应及其衍生技术  14-16
    3.3 免疫学方法  16-18
  4 火鸡组织滴虫的体外培养  18
  5 与其他类似疾病的鉴别  18-19
  6 火鸡组织病的防制措施  19
  7 火鸡组织滴虫与鸡异刺线虫的关系  19-20
  8 火鸡组织滴虫在火鸡体内的分布情况  20-21
  9 研究目的与意义  21-22
第二章火鸡组织滴虫在鸡异刺线虫中的分布情况  22-39
  1 材料和方法  22-30
    1.1 材料  22-25
      1.1.1 样品来源  22
      1.1.2 试验试剂  22-24
      1.1.3 试验器材  24-25
      1.1.4 试验动物和饲料  25
    1.2 方法  25-30
      1.2.1 异刺线虫的采集  25-26
      1.2.2 异刺线虫虫卵悬液的制备及体外培养  26-27
      1.2.3 样品材料的处理和DNA提取  27-28
      1.2.4 基因组序列的PCR扩增  28-30
      1.2.5 试验火鸡的感染  30
  2 结果  30-36
    2.1 鸡异刺线虫雄虫体内火鸡组织滴虫基因扩增情况  30-31
    2.2 鸡异刺线虫雌虫体内火鸡组织滴虫基因扩增情况  31
    2.3 新鲜未胚胎化异刺线虫虫卵内火鸡组织滴虫基因扩增情  31-32
    2.4 培养后胚胎化异刺线虫虫卵内火鸡组织滴虫基因扩增情况  32
    2.5 火鸡组织滴虫在异刺线虫体内的分布情况  32-33
    2.6 不同试验组感染火鸡后发病情况  33-34
    2.7 序列结果及分析  34-36
  3 讨论  36-38
    3.1 火鸡组织滴虫在鸡异刺线虫体内分布结果  36-37
    3.2 感染火鸡结果  37-38
    3.3 测序结果分析  38
  4 结论  38-39
第三章火鸡组织滴虫在火鸡体内的动态分布  39-57
  1 材料与方法  39-43
    1.1 材料  39-40
      1.1.1 样品来源  39
      1.1.2 试验试剂  39
      1.1.3 试验器材  39-40
      1.1.4 实验动物和饲料  40
    1.2 方法  40-43
      1.2.1 异刺线虫的采集  40
      1.2.2 异刺线虫虫卵悬液的制备及体外培养  40
      1.2.3 试验动物的接种  40
      1.2.4 样品材料的采集  40-41
      1.2.5 样品材料的DNA提取  41-42
      1.2.6 基因组序列的PCR扩增  42-43
  2 结果  43-52
    2.1 不同火鸡体内火鸡组织滴虫的基因扩增情况  43-45
    2.2 PCR方法检测组织滴虫在火鸡体内的动态分布  45-49
    2.3 序列分析  49-52
  3 讨论  52-56
    3.1 火鸡组织滴虫在火鸡体内的动态分布  52-56
    3.2 测序结果分析  56
  4 结论  56-57
第四章火鸡组织滴虫感染引起的病理学变化  57-70
  1 材料与方法  57-61
    1.1 材料  57-58
      1.1.1 样品来源  57
      1.1.2 试验试剂  57
      1.1.3 溶液配制  57-58
      1.1.4 实验仪器  58
    1.2 试验方法  58-61
      1.2.1 取材与固定  58-59
      1.2.2 固定后的处理  59-60
      1.2.3 切片  60
      1.2.4 染色  60-61
  2 结果  61-68
    2.1 临床病变  61-63
    2.2 组织学病变观察  63-66
    2.3 HE染色观察火鸡组织滴虫在火鸡体内的分布  66-68
  3 讨论  68-69
  4 结论  69-70
第五章全文总结  70-71
参考文献  71-78
致谢  78-79
作者简历  79

火鸡组织滴虫在火鸡体内的动态分布研究

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