学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

猪后肠产甲烷菌群多样性及其与乙酸生成关系的研究

作　者: 杨翠凤
导　师: 朱伟云
学　校: 南京农业大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 猪 后肠产甲烷菌 多样性 PCR-DGGE 体外发酵
分类号: S828
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 12次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


产甲烷菌在单胃动物后肠的微生物发酵中起着重要的作用,其能利用微生物发酵产生的氢和二氧化碳生成甲烷,从而使后肠维持较低的氢气压,并促进有机物质的降解。迄今为止,国内外对猪后肠产甲烷菌的研究很少,为丰富人们对猪后肠产甲烷菌的理论认识,了解甲烷菌与乙酸还原菌在氢竞争中的关系；本研究以猪为试验动物,应用16SrRNA基因的克隆分析技术和RFLP分析技术相结合,研究了育肥猪粪便中产甲烷菌的多样性；利用DGGE技术研究了仔猪后肠中的产甲烷菌随时空变化的演变规律；利用体外发酵技术初步探究了仔猪后肠的产甲烷菌与乙酸还原菌的竞争关系。试验分为以下三个部分进行。1猪后肠中产甲烷菌的多样性研究采用产甲烷菌特异性引物Met86F/Met1340R,建立了猪粪便中的产甲烷古菌的克隆库。共挑取73个克隆,对所挑克隆进行限制性内切酶酶切分类,从分类单元中挑取两个克隆进行测序,所得序列与Genebank上相似序列比对结果显示,与Methanobrevibacter sp. WBY1相似的克隆占总克隆数的43.8%,与Methanosphaera stadtmanae相似的克隆占总克隆数的24.7%,余下克隆属于一类未知的产甲烷古菌,所占比例31.5%。结果说明,猪粪便中的优势菌为甲烷短杆菌属的Methanobrevibacter sp. WBY1,其次为一类未知的产甲烷古菌。2猪结肠中甲烷菌群多样性的时空变化规律研究利用基于16S rRNA基因的PCR-DGGE技术研究了仔猪从哺乳至断奶后结肠中产甲烷菌菌群的变化,对其图谱进行分析,并对其中优势条带进行了测序。DGGE图谱分析显示,断奶前后产甲烷菌群保持稳定；断奶后两周产甲烷菌条带明显增多。16S rRNA基因序列分析表明,这些条带主要属于甲烷杆菌纲和一类未知产甲烷菌。结果说明,日粮可能是影响产甲烷菌种群的主要因素。3体外发酵法研究猪肠粪样中甲烷与乙酸生成的关系采用体外批次培养技术,以猪粪便为接种物,研究了甲烷生成与乙酸产量间互作变化关系。试验分设对照组和处理组,BES的添加量分别为0、10、20 mM。结果表明,添加BES的浓度为20mM时,乙酸产量和丁酸显著高于对照组(P<0.05)；添加BES的浓度为10mM时,乙酸产量和丁酸较对照组有所上升,但差异不显著(P>0.05)。该结果揭示,添加BES可有效的抑制了甲烷的产生；抑制甲烷合成后,乙酸还原途径可能成为主要的氢利用途径。

全文目录


摘要  6-8ABSTRACT  8-10引言  10-11文献综述  11-23  1 产甲烷菌简介  11-13    1.1 产甲烷菌种类的多样性  11    1.2 产甲烷菌代谢的多样性  11-13  2 猪后肠内的甲烷菌  13-16    2.1 猪后肠内产甲烷菌的分布  14-15    2.2 影响猪后肠产甲烷菌多样性的可能因素  15    2.3 甲烷菌与乙酸还原菌的关系  15-16  3 分子生物学技术在研究产甲烷菌多样性中的应用  16-18    3.1 16SrRNA基因序列分析技术  16-17    3.2 RFLP分析技术  17-18    3.3 变性梯度凝胶电泳技术  18  4 研究目的和意义  18-19  参考文献  19-23第一章 猪后肠中产甲烷菌的多样性研究  23-33  1 材料和方法  23-25    1.1 样品的采集  23    1.2 主要试剂和仪器  23-24    1.3 猪粪便总DNA提取  24    1.4 猪粪便产甲烷古菌16SrRNA基因的扩增  24    1.5 猪粪便产甲烷古菌16SrRNA基因的克隆、检测及测序  24-25    1.6 序列分析及进化树建立  25  2 结果与分析  25-26    2.1 猪粪便产甲烷古菌16SrRNA基因的序列分析  25-26    2.2 猪粪便产甲烷古菌系统进化分析  26  3 讨论  26-30  参考文献  30-33第二章 猪结肠中甲烷菌群多样性的时空变化规律研究  33-43  1 材料和方法  33-35    1.1 试验动物及采样  33    1.2 样品总DNA的提取  33-34    1.3 PCR反应  34    1.4 DGGE  34-35    1.5 序列分析及进化树建立  35  2 结果与分析  35-37    2.1 DGGE结果与分析  35    2.2 猪粪便产甲烷古菌系统进化分析  35-37  3 讨论  37-40  参考文献  40-43第三章 体外发酵法研究猪肠粪样中甲烷与乙酸生成的关系  43-51  1 材料与方法  43-45    1.1 培养基制备和粪样的采集  43-44    1.2 试验设计  44    1.3 指标测定  44-45    1.4 主要试剂和仪器  45    1.5 数据分析  45  2 结果与分析  45-47    2.1 产气量比较  45-46    2.2 甲烷产量  46    2.3 VFA浓度的比较  46-47  3 讨论  47-49  参考文献  49-51全文结论  51-53附录  53-63致谢  63

相似论文

  1. 紫金山树木菌根多样性的调查分析,S718.81
  2. 猪前脂肪细胞分化过程中抵抗素基因表达水平及其影响因素,R587.1
  3. 夏季湖光岩玛珥湖浮游细菌和浮游活性菌遗传多样性的比较,Q938
  4. 高位精养模式日本囊对虾生长及浮游生物演替规律,S968.22
  5. 云南元江干热河谷优势植物内生真菌多样性及其次生代谢产物研究,X172
  6. 不同类型稻田非作物生境的节肢动物多样性,S435.112
  7. 竹黄及其分离真菌的遗传多样性分析,S567.39
  8. 利用AFLP标记对四个多鳞鱚群体的遗传结构分析,S917.4
  9. 湛江北部湾深水海域马氏珠母贝四种壳色选育系F5的生长速度、生长模型及其遗传多样性的SSR分析,S968.31
  10. 福建兴化湾西岸越冬水鸟多样性与生境选择研究,Q958
  11. 云南有色金属矿山细菌多样性初步探究,TD926.4
  12. 猪粪堆肥的理化特征及腐熟度评价研究,S141.4
  13. 河南省小麦纹枯病菌致病力分化及遗传多样性研究,S435.121
  14. 21个荷花品种遗传多样性的ISSR分析,S682.32
  15. 猪BMP7基因启动子多态性及其与繁殖性状关联性分析,S828
  16. 猪BMP7基因外显子和内含子多态性检测及其与繁殖性状关系的研究,S828
  17. 中国玉米南方锈菌的分子遗传多样性和超微结构研究,S435.131.4
  18. 运用SRAP和SSR分子标记研究粉花石斛的遗传多样性和居群遗传结构,S567.239
  19. 猪链球菌2型与猪胸膜肺炎放线杆菌基因工程亚单位疫苗的研究,S858.28
  20. 营养调控对猪生产性能及氮磷排放影响的研究,S828.5
  21. 夏南牛和皮南牛微卫星标记研究及生长发育模型的建立,S823

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 猪
© 2012 www.xueweilunwen.com