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革兰阴性杆菌TEM型β-内酰胺酶耐药基因研究

作　者: 廖经忠
导　师: 刘文恩
学　校: 中南大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 革兰阴性杆菌 ESBLs TEM PCR RAPD
分类号: R446.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 15次
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内容摘要

目的了解中南大学三所附属医院(湘雅医院、湘雅二医院、湘雅三医院)产ESBLs 革兰阴性杆菌 TEM型耐药基因的检出情况,并了解该基因在革兰阴性杆菌中的流行情况。方法从2004年10月至2005年7月在中南大学三所附属医院收集254株多重耐药革兰阴性杆菌,包括171株肠杆菌科细菌和83株非发酵菌。超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的表型检测采用双纸片协同法(DDS)进行,采用多重PCR法对ESBLs表型阳性株进行blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因扩增,用TEM特异性引物对TEM基因整个开放阅读框进行扩增并对PCR产物测序,通过BLAST分析确定基因型；并对携带有TEM基因的革兰阴性菌株用RAPD(随机扩增多态DNA)方法进行菌株的同源性分析。结果从254株临床分离的多重耐药革兰阴性杆菌中共检出153株ESBLs表型阳性菌,其中142株肠杆菌科细菌,11株非发酵菌。经多重PCR方法进行blaTEM、blaSHV、blaOXA-1三组耐药基因的扩增,142株肠杆菌中有105株获得阳性结果,其中有85株菌携带TEM基因,另有26株菌携带SHV基因,有10株菌携带OXA-1基因；11株非发酵菌有6株获得阳性结果,均为携带TEM基因。特异性TEM引物进一步扩增及测序结果显示,全部为TEM-1型广谱β-内酰胺酶。对携带blaTEM耐药基因的主要的菌株进行RAPD分析,其中大肠埃希菌有12种RAPD类型,肺炎克雷伯菌有6种RAPD类型,阴沟肠杆菌有7种RAPD类型。结果显示虽然RAPD类型呈现高度多样性,但也存在较多RAPD类型一致的菌株。结论(1)TEM-1型β-内酰胺酶是湖南地区主要流行的TEM型耐药基因。(2)多种细菌携带TEM型β-内酰胺酶,但大肠埃希菌产TEM酶情况尤为突出。(3)发现在同一医院以及同一病区存在TEM-1型β-内酰胺酶的克隆传播。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
缩略词表  9-10
第一章前言  10-12
第二章材料与方法  12-17
  2.1 材料  12-14
    2.1.1 临床菌株  12
    2.1.2 标准菌株  12
    2.1.3 主要试剂  12-13
    2.1.4 主要仪器  13-14
  2.2 方法  14-17
    2.2.1 技术路线  14
    2.2.2 ESBLs检测  14-15
    2.2.3 细菌DNA提取  15
    2.2.4 引物合成  15
    2.2.5 多重PCR检测blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因  15-16
    2.2.6 特异性PCR扩增  16
    2.2.7 随机扩增多态性DNA(RAPD)  16
    2.2.8 特异性PCR扩增产物测序及基因型的确定  16-17
第三章结果  17-28
  3.1 双纸片协同法检测ESBLs表型结果  17
  3.2 多重PCR检测blaTEM、blaSHV、blaOXA-1三组耐药基因结果  17-19
  3.3 特异性PCR扩增TEM型ESBLs整个阅读框结果  19-20
  3.4 RAPD结果  20-22
  3.5 测序结果  22-28
第四章讨论  28-33
  4.1 ESBLs表型检测结果分析与讨论  28
  4.2 多重PCR结果分析与讨论  28-30
  4.3 TEM特异性PCR扩增结果与讨论  30
  4.4 携带blaTEM基因的革兰阴性菌RAPD分析与讨论  30-31
  4.5 测序结果分析与讨论  31-33
第五章结论  33-34
参考文献  34-38
综述  38-47
致谢  47-48
攻读学位期间研究成果  48

革兰阴性杆菌TEM型β-内酰胺酶耐药基因研究

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