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2810025M15Rik基因在小鼠胚胎期的表达调控机制的研究

作　者: 高卓
导　师: 吴琼
学　校: 哈尔滨工业大学
专　业: 生化与分子生物学
关键词: 胚胎发育 基因表达 原位杂交 DNA甲基化
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


本课题对与小鼠胚胎发育相关的新基因2810025M15Rik的表达模式及调控机制做初步分析。采用real-time quantitative RT-PCR和原位杂交的方法对该基因进行RNA水平的表达谱分析;以Bisulfite测序方法对启动子区CpG岛的甲基化状态进行了分析,以探究其表达调控方式;并采用直接测序法鉴定其印记表达模式。原位杂交结果显示E10.5的小鼠胚胎中这一基因的表达信号集中在端脑、中脑、后脑、腮弓、前肢芽及尾芽,E11.5时在菱脑和后肢芽也出现了表达信号,E13.5组织切片原位杂交中这一基因的表达信号在前脑、中脑、第三脑室上方的大脑皮层以及肝脏极为显著。Real-time quantitative RT-PCR的结果显示,在E12.5的小鼠胚胎中处于一个相对较高的转录水平;E15.5时,这一基因在肺中表达最强,脑及肾脏中次之,肝脏最弱;E18.5这一阶段,基因的表达水平发生了显著的变化,在各个主要脏器中均呈现降低的趋势,这一时期在肺中表达最强,肝脏中的转录水平最低。对基因启动子区CpG岛的甲基化情况分析后发现待测位点呈非甲基化状态。此外,在C57Bl/6J(B6)和Balb/C两个品系的小鼠间发现了一个单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphism),即SNP位点,尔后的印记分析表明2810025M15Rik基因在脑、心和肺组织呈双等位表达。以上结果显示2810025M15Rik基因在小鼠胚胎发育中后期有着持续广泛的双等位表达,可能对胚胎的正常发育起着重要的调控作用。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-7
第1章 绪论  7-17
  1.1 课题来源  7
  1.2 论文研究主要内容、目的和意义  7-8
    1.2.1 论文主要研究内容  7-8
    1.2.2 研究目的和意义  8
  1.3 关于2810025M15Rik  8-9
  1.4 原位杂交  9-11
    1.4.1 基本原理  9-10
    1.4.2 探针类型  10
    1.4.3 应用及优势  10-11
  1.5 实时荧光定量RT-PCR（Real-time quantitative RT-PCR）  11-13
    1.5.1 基本原理  11
    1.5.2 荧光探针和荧光染料  11-13
    1.5.3 主要应用  13
  1.6 DNA的甲基化与基因表达调控  13-16
    1.6.1 DNA甲基化的检测方法  15
    1.6.2 DNA甲基化与胚胎发育  15-16
  1.7 本章小结  16-17
第2章 材料与方法  17-26
  2.1 实验材料及器材  17-18
    2.1.1 实验动物  17
    2.1.2 实验试剂  17
    2.1.3 主要实验仪器  17-18
  2.2 实验方法与步骤  18-26
    2.2.1 基础分子生物学实验  18-21
    2.2.2 原位杂交  21-23
    2.2.3 实时定量RT-PCR（Real-time quantitative RT-PCR）  23-24
    2.2.4 基因的印记分析  24
    2.2.5 启动子区潜在调控区DNA甲基化分析  24-26
第3章 2810025M15Rik的生物信息学分析  26-31
  3.1 2810025M15Rik的cDNA序列及编码蛋白分析  26-27
  3.2 2810025M15Rik的结构分析  27-28
  3.3 脑部及脊柱原位杂交信息  28-29
  3.4 讨论  29
  3.5 本章小结  29-31
第4章 2810025M15Rik的表达谱分析  31-40
  4.1 原位杂交分析2810025M15Rik的时空特异性表达  31-33
  4.2 实时定量PCR分析2810025M15Rik基因阶段特异性表达  33-35
  4.3 2810025M15Rik的印记分析  35-37
  4.4 讨论  37-39
  4.5 本章小结  39-40
第5章 2810025M15Rik启动子区甲基化情况分析  40-44
  5.1 甲基化重组子的构建  40-41
  5.2 2810025M15Rik启动子区待测CpG位点甲基化情况分析  41
  5.3 讨论  41-42
  5.4 本章小结  42-44
结论  44-45
参考文献  45-51
附录  51-52
攻读学位期间发表的学术论文  52-54
致谢  54

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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程（遗传工程）
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