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圆弧青霉菌毒素—青霉酸对小鼠肾脏损伤的实验研究

作　者: 郭乐
导　师: 袁慧
学　校: 湖南农业大学
专　业: 临床兽医
关键词: 青霉酸肾损伤 SOD 细胞凋亡
分类号: S816
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:本实验主要探讨青霉酸(PA)对小鼠肾脏的损伤及其相关的作用机理。方法:采用25-30日龄健康的昆明系小鼠160只,雌雄各半,分开饲养,称重后将雌雄各分为空白对照组、青霉酸低、中、高剂量组四组,灌胃攻毒一个月后处死,攻毒前后称重,检测肾功能以及尿液中的NAG;检测小鼠肾脏的病理形态学变化;取部分肾脏组织进行肾细胞DNA损伤检测,肾匀浆中MDA,SOD含量的测定;TUNEL法检测肾脏细胞的凋亡;RT-PCR法检测P53,Bax、Bcl-2、Fas、Fasl基因表达。结果:试验组小鼠的体重明显降低,肾功能检测中BUN、UA、NAG均显著升高:PA三个试验组MDA增加、而SOD活性降低,且随着剂量的加大变化越明显;病理切片显示,青霉酸对肾的损害主要集中在肾小管,最高剂量组肾小管上皮细胞空泡变性,大部分细胞核出现固缩,有的细胞核已经开始溶解;TUNEL法检测肾脏细胞的凋亡显示,PA能明显促进肾小管上皮细胞的凋亡;RT-PCR检测,对照组基因表达正常,PA组P53,Bax表达均高于对照组,Bcl-2表达低于对照组;雌性FAS的表达低于对照组。结论:(1)青霉酸能造成小鼠体重的下降。(2)青霉酸对小鼠肾脏有明显的损害作用,从肾功能检测及病理切片可以看出,主要的损伤部位在肾小管上皮细胞。(3)脂质过氧化反应是青霉酸引起肾损伤的主要原因。它能使小鼠肾组织中SOD活性降低及MDA含量上升,而且剂量越高,效果越明显(4)凋亡是青霉酸损伤肾脏的另一条途径,它通过促进Bax和P53的表达,抑制Bcl-2的表达,来诱导肾小管上皮细胞发生凋亡。(5)青霉酸对雄性的毒性大于雌性,这可能与Fas的表达有关。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-9
前言  9-15
  1.研究背景  9
  2.青霉酸的简介  9-13
  3.本研究的目的与意义  13-15
材料与方法  15-30
  1.材料  15-19
    1.1 主要仪器设备  15
    1.2 供试材料  15
    1.3 主要试剂  15-17
    1.4 试剂配置  17-19
  2.方法  19-30
    2.1 实验动物及试验分组  19-20
    2.2 肾功能及化学指标测定  20-21
    2.3 青霉酸对小鼠肾脏病理组织学检查  21-22
    2.4 小鼠肾组织中SOD活性和MDA含量的测定  22-23
    2.5 总蛋白含量测定  23
    2.6 青霉酸致肾细胞DNA损伤的检测  23-24
    2.7 TUNEL法检测肾细胞凋亡  24-25
    2.8 RT-PCR检测基因Bax,Bcl-2,P53,Fas,FasL的表达  25-30
结果与分析  30-40
  1 小鼠体重及肾功能检测结果  30-31
  2 小鼠肾组织切片结果  31-33
  3 青霉酸致肾细胞DNA损伤的检测结果  33
  4 青霉酸对小鼠肾脏细胞MDA含量和SOD活性的影响  33-34
  5 Tunel法检测青酶酸对小鼠肾小管上皮细胞凋亡  34-36
  6 RT-PCR法检测凋亡基因的表达  36-40
讨论  40-46
  1 青霉酸对小鼠体重肾功能的影响  40-41
  2 病理组织学变化  41
  3 青霉酸对肾细胞DNA的损伤作用  41
  4 青霉酸对小鼠肾细胞MDA含量和SOD活性的影响  41-42
  5 青霉酸对小鼠肾细胞凋亡的影响  42-43
  6 青霉酸对小鼠肾脏细胞各组基因表达的影响  43-46
结论与创新点  46-47
参考文献  47-54
英文缩写词  54-55
致谢  55-56
作者简介  56

圆弧青霉菌毒素—青霉酸对小鼠肾脏损伤的实验研究

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