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丙戊酸钠对急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat及骨髓瘤细胞株U266增殖抑制作用及调控组蛋白乙酰化修饰的研究

作　者: 朱艺芳
导　师: 叶宝国；沈建箴
学　校: 福建医科大学
专　业: 内科学
关键词: 丙戊酸钠 Jurkat细胞 U266细胞 组蛋白乙酰化 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 细胞凋亡
分类号: R733.71
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:研究丙戊酸钠(valproic acid sodium,VPA)在体外对Jurkat细胞及U266细胞增殖抑制作用及对细胞周期的影响;观察VPA对组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)及组蛋白乙酰化修饰调控的影响,初步探讨白血病及骨髓瘤的发生、发展与表观遗传学之间的联系,从而进一步阐明白血病及骨髓瘤发生、发展的可能机制。观察VPA对Jurkat细胞及U266细胞的促凋亡作用及调节相关基因的转录水平,并探讨促凋亡的可能途径。另外进一步研究VPA对原代细胞的增殖抑制作用及调控组蛋白乙酰化修饰,进而诱导相关基因的重新表达。方法:采用CCK-8法检测VPA对Jurkat细胞及U266细胞增殖的抑制作用;光镜下观察细胞增殖及克隆抑制情况;Hoechst 33258荧光染色,DNA凝胶电泳观察细胞凋亡情况;应用流式细胞仪检测VPA作用前后Jurkat细胞及U266细胞周期及细胞凋亡的变化情况;半定量RT-PCR检测VPA作用前后Jurkat细胞及U266细胞中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)、p21waf1/cip1、p27kip1、c-myc、survivin mRNA的表达变化;Western blot方法检测VPA作用前后HDAC1、组蛋白H3、H4乙酰化水平及caspase-3、caspase-9蛋白的表达情况。同样应用CCK-8法检测VPA对原代细胞增殖的抑制作用,用RT-PCR法检测VPA作用前后原代细胞HDAC1、p21waf1/cip1、p27kip1、c-myc、survivin mRNA表达的变化,用Western blot方法检测VPA作用前后原代细胞HDAC1、组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平的变化。结果:(1)VPA对Jurkat细胞及U266细胞的增殖抑制作用呈时间-浓度依赖性;光镜下观察可见药物作用后细胞增殖受抑制及克隆形成抑制。(2)VPA处理Jurkat细胞及U266细胞48h后,细胞周期检测显示G0/G1期比例增高,S期比例下降,细胞被阻滞在G0/G1期。(3)与未处理组相比,VPA作用Jurkat细胞及U266细胞48h后HDAC1基因mRNA和蛋白水平表达减弱,而组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平表达增加。(4)与未处理组相比,VPA作用Jurkat细胞及U266细胞48h后Hoechst 33258荧光染色可见细胞凋亡增加,细胞核致密浓染;DNA凝胶电泳可见典型的DNA梯形条带;流式细胞仪检测细胞凋亡率增加。(5)与未处理组相比,VPA作用Jurkat细胞及U266细胞48h后p21waf1/cip1、p27kip1 mRNA的表达增强,而c-myc、survivin mRNA的表达减弱,procaspase-3、procaspase-9蛋白表达也降低。(6)VPA作用原代ALL细胞后,可见细胞增殖生长受抑制,呈时间-浓度依赖性;VPA作用48h后HDAC1基因mRNA和蛋白水平表达减弱,而组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平表达增加;p21waf1/cip1、p27kip1 mRNA的表达增强,而c-myc、survivin mRNA的表达减弱。结论:(1)VPA在体外能够抑制Jurkat细胞及U266细胞增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,促进细胞凋亡,并调节相关基因表达,这可能与VPA抑制HDAC1表达,上调组蛋白H3、H4乙酰化水平有关。(2)VPA在体外能够抑制原代ALL细胞增殖,下调HDAC1的表达,提高组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平,调节相关基因的表达。这为今后VPA在治疗白血病方面提供一定的理论基础。

全文目录


英文缩略词表  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
引言  9-11
第一部分 VPA 对急性T 淋巴细胞白血病Jurkat 细胞株及骨髓瘤U266 细胞株增殖、活力和细胞周期的影响  11-22
  材料和方法  11-12
  结果  12-20
  讨论  20-22
第二部分 VPA 抑制Jurkat 细胞株和U266 细胞株HDAC1 的表达及对组蛋白H3、H4 乙酰化状态的影响  22-29
  材料和方法  22-25
  结果  25-27
  讨论  27-29
第三部分 VPA 对Jurkat 细胞株和U266 细胞株凋亡作用的影响及对 p21~(waf1/cip1)、p27~(kip1)、c-myc、survivin mRNA 表达的影响  29-41
  材料和方法  29-31
  结果  31-37
  讨论  37-41
第四部分 VPA 对急性淋巴细胞白血病原代细胞抑制作用的研究  41-47
  材料和方法  41-42
  结果  42-44
  讨论  44-47
结论  47-48
参考文献  48-53
致谢  53-54
综述 丙戊酸钠在恶性血液病中的实验和临床研究  54-62

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病 > 急性白血病
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