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大鼠骨髓间充质干细胞培养及体外诱导向神经元样细胞分化的研究

作　者: 秦华丽
导　师: 蒋明
学　校: 中南大学
专　业: 临床医学
关键词: 骨髓间充质干细胞诱导方法神经元样细胞内耳移植
分类号: R764.43
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：建立SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外培养体系,诱导分化为神经元样细胞,筛选较好的体外诱导方法,为下一步内耳移植实验提供前期研究基础。方法：LBMSCs培养：主要采用全骨髓直接贴壁法培养BMSCs并传代,取P3代行流式细胞仪检测BMSCs表面标志CD29, CD90及造血细胞表面抗原CD45的表达。2.取P4代BMSCs,由碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h后,分别加入：A组诱导剂：神经营养素3(NT-3),维甲酸(RA)；B组诱导剂：p-硫基乙醇(BME)。诱导lh,5h,24h,7d,14d,21d后,采用细胞免疫荧光方法鉴定,检测成熟神经元标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达情况,观察两组是否有染色阳性的神经元样细胞及比较阳性率的高低。结果：1.全骨髓贴壁筛选法简便,所获得的细胞数量多,增殖分化快。2.流式细胞仪检测BMSCs表达CD90、CD29;不表达CD45,结合细胞形态分析,符合BMSCs的特征。3.细胞免疫荧光结果示NSE阳性表达,A组诱导分化为神经元样细胞的阳性率明显高于B组。结论：1.全骨髓贴壁筛选法分离培养的BMSCs所获得的细胞数量多,增殖分化快,纯度高。2.采取分步诱导和联合诱导BMSCs,由bFGF预诱导24h后,换用NT-3+RA诱导分化为神经元样细胞NSE阳性率明显高于BME诱导,是一种比较好的诱导方案。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
目录  7-9
符号说明  9-10
1 前言  10-12
2 BMSCs的分离培养及鉴定  12-23
  2.1 实验材料与试剂  12-13
    2.1.1 实验动物  12
    2.1.2 主要实验仪器设备  12
    2.1.3 主要试剂  12-13
    2.1.4. 基本试剂的配制  13
    2.1.5 实验器械  13
  2.2 实验方法  13-16
    2.2.1 技术路线  13-14
    2.2.2 BMSCs的分离和培养  14-15
    2.2.3 BMSCs表面标志物的鉴定  15-16
  2.3 实验结果  16-20
    2.3.1 不同培养时间BMSCs形态变化  16-19
    2.3.2 BMSCs的流式细胞仪结果  19-20
  2.4 讨论  20-23
    2.4.1 鼠龄的选择  20-21
    2.4.2 BMSCs的取材分离及纯化  21
    2.4.3 BMSCs的培养  21-22
    2.4.5 存在的问题  22-23
3 BMSCs的体外诱导分化  23-34
  3.1 材料与方法  23-24
    3.1.1 主要仪器设备  23
    3.1.2 主要试剂及耗材  23-24
    3.1.3 主要试剂及培养液的配置  24
  3.2 实验方法  24-25
    3.2.1 技术路线  24
    3.2.2 BMSCs诱导分化成神经样细胞  24-25
    3.2.3 细胞免疫荧光鉴定  25
    3.2.4 BMSCs诱导分化成神经样细胞分化率的比较  25
  3.3 结果  25-29
    3.3.1 细胞形态学变化  25-27
    3.3.2 细胞免疫荧光鉴定结果  27-29
    3.3.3 BMSCs诱导后NSE阳性表达率  29
  3.4 讨论  29-34
    3.4.1 BMSCs诱导分化成神经样细胞的诱导方法  29-30
    3.4.2 BMSCs诱导分化成神经样细胞的诱导分化机制  30-32
    3.4.3 BMSCs诱导分化成神经元细胞样细胞的检测  32-33
    3.4.4 BMSCs诱导分化成神经样细胞的应用前景  33-34
4 结论  34-35
参考文献  35-43
综述  43-52
  参考文献  48-52
攻读学位期间主要的研究成果  52-53
致谢  53-54

大鼠骨髓间充质干细胞培养及体外诱导向神经元样细胞分化的研究

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