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经H2O2预处理的骨髓间充质干细胞移植对急性心梗后心室重构影响的实验研究

作 者: 袁丰
导 师: 于曙东;沈振亚
学 校: 苏州大学
专 业: 胸心血管外科学
关键词: 氧化预处理 骨髓间充质干细胞 急性心肌梗死 心室重构 旁分泌
分类号: R542.22
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


目的:利用H2O2预处理骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs),于心梗后急性期移植,研究其对急性心肌梗死心室重构的影响,并对其机制进行初步的探讨。方法:体外实验:将第三代MSCs置入二十四孔板培养皿中培养,分别予0μmol/L、20μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L H2O2预处理MSCs后培养72h,通过ELISA法测定MSCs上清液中血管内皮生长因子(vascular endothelium growth factor,VEGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的浓度;另外,分别予H2O2预处理MSCs 0h、12h、24h、36h、48h后培养72h,通过ELISA法测定MSCs上清液中VEGF、HGF的浓度。体内试验:20只健康太湖梅山猪,经心导管用明胶海绵栓塞冠状动脉左前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)第二对角支建立猪的急性心肌梗死模型,随机分为4组:A组(对照组):心梗后24h通过介入方法在心梗区注射DMEM;B组(氧化干细胞上清液组):心梗后24h注射经H2O2预处理的MSCs的培养上清液;C组(干细胞组):心梗后24h移植未经处理的MSCs;D组(氧化干细胞组):心梗后24h移植经过H2O2预处理的MSCs。各组在不同时间点通过ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha ,TNF-α)浓度。心梗前、心梗后24h、干细胞移植后4w行Powerlab+Millar压力导管和磁共振检测心功能指标。干细胞移植后4w获取猪心,TTC法测量心梗面积,免疫组化染色检测非梗死区基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制酶-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)的表达,并通过vWF(von Willebrand factor,vWF)免疫组化染色计数新生血管密度。结果:体外实验:不同浓度H2O2预处理MSCs,20μmol/L组中VEGF、HGF的浓度较0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L组中明显增高(p<0.05);H2O2预处理MSCs不同时间,24h组中的VEGF、HGF的浓度较0h、12h、36h、48h组中明显增高(p<0.05)。体内试验:D组和B组同时间点血清TNF-α浓度较A和C组降低(p<0.05)。移植后4w D组和B组与A组相比,左室压上升及下降最大速率(+dp/dtmax,-dp/dtmax)、左心室发展压(left ventricular developed pressure,LVDP)以及舒张末期室壁厚度(end-diastolic wall thickness,EDWT)、每搏输出量(stroke volume,SV)表达明显上升(p<0.05),同时心肌MMP-9蛋白表达及心梗面积较A组明显减少(p<0.05),心肌TIMP-1蛋白表达和梗死周围区毛细血管密度明显增加(p<0.05);且D与B组相比,D改善更为明显(p<0.05);C组上述指标较A组无明显改善。结论:1、20μmol/L H2O2预处理MSCs24h能增强细胞因子VEGF、HGF的分泌。2、心梗后急性期移植H2O2预处理的MSCs,降低促炎因子的表达水平,减少心室基质重构,改善梗死周边区血供,从而抑制心室重构。3、心梗后急性期移植H2O2预处理的MSCs明显改善心功能,部分机制可能为H2O2预处理增加了MSCs相关细胞因子的分泌。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-9
前言  9-11
材料和方法  11-21
结果  21-36
讨论  36-46
结论  46-47
参考文献  47-53
综述  53-62
  参考文献  59-62
缩略词表  62-63
攻读学位期间公开发表的论文  63-64
致谢  64-66

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管(循环系)疾病 > 心脏疾病 > 心肌疾病 > 心肌梗塞
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