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转导胞嘧啶脱氨酶基因的骨髓间充质干细胞在体内对胶质瘤趋向性的研究

作 者: 姬广春
导 师: 宋飞
学 校: 大连医科大学
专 业: 外科学
关键词: 胞嘧啶脱氨酶基因 骨髓间充质干细胞 胶质瘤
分类号: R739.4
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


目的:越来越多的研究表明,骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,MSCs)在体内有强大的迁移力和肿瘤趋向性。但转染外源基因的骨髓间充质干细胞在体内迁移力和肿瘤趋向性鲜有报道。胞嘧啶脱氨酶(Cytosine deamimase,CD)基因是近年被广泛关注的肿瘤治疗基因。本实验构建SD大鼠颅内C6胶质瘤动物模型,通过荧光显微镜观察转导胞嘧啶脱氨酶基因并携带有增强型绿色荧光蛋白的骨髓间充质干细胞(MSCs-CD/eGFP)向胶质瘤迁移、分布的情况,探讨通过荷瘤同侧颈内动脉、肿瘤对侧脑内及肿瘤原位三种不同接种途径MSCs-CD/eGFP细胞对胶质瘤趋向性的影响,并探索一种理想的适合临床应用接种途径。方法:使用颅内立体定向接种法建立SD大鼠颅内C6胶质瘤模型。术前12小时大鼠禁食禁水,用10 %水合氯醛(3 ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠后,头部用立体定位仪固定,剪去头顶毛发,碘酒、酒精消毒后铺洞巾,沿正中矢状线纵向切开头皮约1.5 cm ,分离暴露顶骨(头顶双侧眼裂连线后大约1.5cm处横向切开头皮,暴露前囟颅骨标志),按大囟中点前1.0 mm ,矢状缝右旁开3~3.5 mm ,大致定位,颅骨钻钻孔,孔径2.0 mm ,深达硬脑膜。微量注射器进针深度为硬膜下6.0 mm,后退回针1.0mm。按每只鼠1×106细胞悬液15μl于10 min内注入靶区,留针5 min ,使细胞充分沉积。缓慢拔针后用骨蜡封闭骨孔,用生理盐水冲洗术野,1号丝线缝合头皮切口。建模后的第6天,从24只大鼠中随机抽取8只,用10 %水合氯醛(3 ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠后,分别从矢状位、冠状位和水平位行MRI扫描,平扫完毕后大鼠经尾静脉注射0.2mmol/kg钆双胺作增强扫描,观察肿瘤生长情况。待瘤龄7天后,分别从荷瘤侧颈内动脉(A组)、对侧大脑半球(B组)以及同侧胶质瘤内(C组)注入1×106个MSCs-CD/eGFP细胞。待细胞接种后第8天,灌注固定取脑,脑组织切片,荧光显微镜下观察以eGFP作为示踪剂标记的MSC-CD/eGFP细胞在组织切片中的分布。结果:SD大鼠颅内C6胶质瘤模型建模成功后第6天,SD大鼠颅脑MRI平扫加增强检测示C6胶质瘤细胞颅内接种区均可见有圆形或椭圆形肿瘤团块形成,而且呈浸润性生长,部分肿瘤周围可见水肿带,有明显占位效应,部分肿瘤中心可见坏死区,肿瘤不均匀强化。SD大鼠颅内C6胶质瘤模型建模成功后第7天接种MSCs-CD/eGFP细胞,待细胞接种后第8天,灌注固定取脑,脑组织切片,从荧光显微镜下观察可以得知,无论是通过荷瘤侧颈动脉还是对侧脑半球以及同侧胶质瘤内给MSCs-CD/eGFP细胞,MSCs-CD/eGFP细胞仅分布于C6胶质瘤组织的内部和边缘部位,而在健侧脑组织和肿瘤侧正常脑组织中未见MSCs-CD/eGFP细胞。同侧颈动脉给MSCs-CD/eGFP细胞,MSCs-CD/eGFP细胞较均一的分布于胶质瘤组织的内部,很少迁移到肿瘤与正常组织交界处。通过颅内接种的MSCs-CD/eGFP细胞,无论接种的部位是对侧脑半球、还是同侧胶质瘤内,MSCs-CD/eGFP细胞分布于胶质瘤组织的内部和边缘部位,且主要分布于胶质瘤不规则形状的边缘,呈包绕状分布图。接种于对侧脑半球的MSCs-CD/eGFP细胞主要分布于距离MSCs-CD/eGFP细胞接种位点的肿瘤近侧端,而远侧端少见。结论:建立了SD大鼠颅内C6胶质瘤模型,建模成功率100%。转导CD基因的骨髓间充质干细胞MSCs-CD/eGFP在体内仍具有强大的迁移力和趋瘤性,经颈内动脉接种的MSCs-CD/eGFP细胞主要分布于肿瘤组织内部及边缘,是临床研究脑胶质瘤基因治疗的理想细胞载体,从而为进一步探讨转导CD基因的BMSCs对大鼠C6胶质瘤细胞体内抑制作用打下了良好的基础。

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摘要  6-8Abstract  8-11前言  11材料和方法  11-16结果  16-20讨论  20-23结论  23-24参考文献  24-27综述  27-36  参考文献  33-36附录  36-38  缩略词  36  论文发表情况  36-37  实验流程图  37-38致谢  38

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 神经系肿瘤
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