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佐剂关节炎大鼠肺损伤形态学观察

作　者: 吴建玲
导　师: 宋宁
学　校: 河北医科大学
专　业: 内科学
关键词: 佐剂关节炎肺损伤卡介苗完全弗氏佐剂大鼠类风湿因子羟脯氨酸
分类号: R593.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

目的：建立佐剂关节炎（Adjuvant arthritis，AA）大鼠模型，观察AA大鼠肺部病变的形态学变化特点，探讨AA大鼠肺损伤是否能模拟类风湿肺的形态学变化，观察肺部出现肺泡炎和纤维化病变的最佳时间，并在特定时间点观察不同浓度完全弗氏佐剂（Complete freund’sadjuvant,CFA）对AA大鼠肺损伤的影响，为进一步研究类风湿肺奠定基础。方法：实验设计与分组：第一部分：观察AA大鼠肺损伤随时间的动态变化：选取清洁级健康Wistar雄性大鼠48只，由河北医科大学实验动物中心提供，体重（170±10）g，适应性饲养一周后，随机分为对照组（Control组,n=24）和模型组（Model组，n=24）。模型组：大鼠右后足趾皮内分别注射0.1ml的CFA，含卡介苗（Bacillus calmette-guerin,BCG）浓度为7.5mg/ml。对照组：大鼠右后足趾皮内注射0.1ml生理盐水。于造模后第7d、14d、28d、56d放血处死大鼠。第二部分：在第一部分研究的基础上，选取特定时间点观察不同浓度CFA对AA大鼠肺损伤的影响：选取清洁级健康Wistar雄性大鼠48只，由河北医科大学实验动物中心提供，体重（170±10）g，适应性饲养一周后，随机分为CFA5mg组、7.5mg组、10mg组和对照组，造模大鼠右后足趾皮内分别注射0.1ml的不同浓度的CFA，对照组大鼠右后足趾皮内注射0.1ml生理盐水，于造模后第14d、28d放血处死大鼠。实验方法：实验过程中监测大鼠足爪肿胀度，并对关节炎指数(Arthritis index,AI)进行评分。处死大鼠同时收集其血液，酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清中类风湿因子（Rheumatoid factor,RF）含量；摘取大鼠右肺下叶，4%多聚甲醛溶液固定，行HE染色观察大鼠肺组织形态学变化；行Masson胶原染色观察大鼠肺组织纤维胶原沉积情况；且取左下肺组织碱水解法测定肺组织羟脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)含量；取大鼠继发性炎性水肿的踝关节，4%多聚甲醛溶液固定，并行脱钙处理后，HE染色观察关节组织病理学改变，参考文献方法行肺组织及关节组织病理评分。应用SPSS20.0统计软件对每组数据进行分析。结果：第一部分：观察AA大鼠肺损伤随时间的动态变化:1模型组大鼠肺泡炎程度均较对照组各相同时间点升高有统计学意义（P<0.05），模型组14天肺泡炎程度最高；模型组7天肺纤维化程度较对照组7天比较无明显差异（P>0.05），14天、28天、56天肺纤维化程度模型组较对照组相同时间点严重（P<0.05），模型组28天肺纤维化最显著。2模型组大鼠肺HYP含量随时间延长逐渐升高，至28天达高峰，模型组均较对照组各相同时间点升高有统计学意义（P<0.05）。3模型组大鼠血清中RF水平14天明显升高，28天、56天一直维持较高水平，模型组均较对照组各相同时间点升高有统计学意义（P<0.05）。4模型组造模足（右足）关节肿胀度均较对照组各相同时间点肿胀明显（P<0.05），14天时肿胀最明显；7天大鼠非造模足（左足）关节肿胀度较对照组7天无明显差异（P>0.05），14天、28天、56天组均较对照组相同时间点肿胀明显（P<0.05），28天达高峰之后消退；模型组大鼠AI均较对照组各相同时间点评分高（P<0.05）；模型组7天关节病理积分较对照组7天无明显变化（P>0.05），14天、28天、56天组积分高于对照组相同时间点有统计学意义（P<0.05），56天病理积分最高。第二部分：观察不同浓度CFA对AA大鼠肺损伤的影响:114天造模大鼠肺组织肺泡炎程度均较对照组明显（P<0.05），7.5mg、10mg组肺泡炎程度较5mg组严重（P<0.05），但两组之间无明显差异（P>0.05）。28天造模大鼠肺纤维化程度较对照组严重（P<0.05），7.5mg、10mg组肺纤维化程度较5mg组严重（P<0.05），但两组之间无明显差异（P>0.05）。214天、28天造模大鼠肺组织HYP含量均较对照组相同时间点升高（P<0.05），7.5mg、10mg组含量高于5mg组（P<0.05），但两组之间无明显差异（P>0.05）。314天、28天大鼠血清中RF水平均较对照组相同时间点升高（P<0.05），7.5mg、10mg组RF水平高于5mg组（P<0.05），但两组之间无明显差异（P>0.05）。414天造模大鼠7.5mg、10mg组大鼠关节肿胀度较对照组和5mg组肿胀明显（P<0.05），但7.5mg、10mg组之间无差异；造模大鼠AI，关节病理积分均较对照组评分高（P<0.05），7.5mg、10mg组较5mg组AI评分高（P<0.05），但两者之间无差异。28天造模大鼠关节肿胀度均较对照组肿胀明显（P<0.05），7.5mg、10mg组较5mg组肿胀明显（P<0.05），但两者之间无差异；造模大鼠7.5mg、10mg组AI评分高于对照组和5mg组（P<0.05），但7.5mg、10mg组之间无差异；造模大鼠7.5mg、10mg组病理积分高于对照组（P<0.05），10mg组积分高于5mg组（P<0.05），5mg、7.5mg组比较无明显差异（P>0.05）。结论：1AA大鼠模型可观察到随时间变化的肺部形态学动态改变，造模后14天炎性病变显著，可见肺泡间隔明显增厚，肺泡上皮坏死，肺泡水肿变形，肺间质内细胞浸润显著，成纤维细胞增多。28天时病变以纤维化为主，可见多量致密的被染成绿色的胶原纤维。说明AA大鼠在发生关节炎病变的同时存在肺泡炎和肺纤维化改变，可作为动物模型用于模拟类风湿肺损伤。2选取特定时间点观察CFA含BCG的最佳浓度为7.5或10mg/ml对AA大鼠肺损伤的影响最显著，二者无明显差异。

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摘要  4-7
ABSTRACT  7-11
前言  11
第一部分：观察佐剂关节炎大鼠肺损伤随时间的动态变化  11-28
  材料与方法  11-19
  结果  19-23
  附图  23-26
  附表  26-28
第二部分：观察不同浓度完全弗氏佐剂对佐剂关节炎大鼠肺损伤影响  28-36
  材料和方法同前  28-29
  结果  29-32
  附图  32-34
  附表  34-36
讨论  36-40
结论  40
参考文献  40-43
综述类风湿关节炎肺间质病变研究进展  43-55
  参考文献  50-55
致谢  55-56
个人简历  56

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